探究痛觉和痒觉信号在小鼠脊髓的传导机制.pdfVIP

摘 要 痛觉和痒觉对机体具有十分重要的生理意义，可以帮助我们抵御外界有害刺 激带来的伤害。但慢性疼痛和慢性瘙痒却是疾病，会给病人带来生理和心理上的 长久折磨。尽管关于痛觉和痒觉在外周和中枢的传导通路已有了较多研究，但这 两种感觉在脊髓层面的编码方式和相互关系仍有很多谜团。此外，已知胃泌素释 放肽受体（Gastrin-releasing peptide receptor ，GRPR ）是痒觉信号传导过程中的特 异性受体蛋白，但其和痛觉的关系尚不明晰。 本实验创新性地构建了痛、痒双重刺激动物模型，并以c-fos 为神经元活动 标志物，在同一动物的脊髓同时标记痒觉引起的c-fos 蛋白信号和痛觉引起的c- fos mRNA 信号，从而探究这两种刺激引起的感觉在脊髓层面的传导机制。本实 验还利用GRPR-Cre;tdTomato 小鼠对GRPR 作特异性标记，以探究GRPR 在痛 痒通路中的参与情况。 实验结果显示，在小鼠足背皮下注射多聚甲醛 （Paraformaldehyde ，PFA ； 4% ，5 μL ）可以引起动物疼痛行为，包括舔舐、回缩和抬足，呈现出典型的双峰 行为学特征。疼痛刺激所激活的c-fos 信号在脊髓背角的分布主要集中在Ⅰ、Ⅱ和 Ⅴ层，纵向主要分布在腰椎 L4~L5 节段。足背皮下注射氯喹（Chloroquine, CQ; 10%, 5 μL ）可以引起小鼠痒反应，包括舔舐和咬行为。痒刺激所激活的c-fos 信 号比疼痛刺激信号更为集中，主要分布在脊髓背角的I-II 层，纵向分布在L5 节 段。此外，痛和痒两种刺激引起的c-fos 信号在脊髓存在一定程度的共定位，约 占痛觉激活神经元的28.6 ±3.1%，占痒觉激活神经元的 51.9±3.7% 。有趣的是， GRPR 阳性神经元与痒觉相关神经元和痛觉相关神经元都存在共标，占痒刺激激 活神经元的 50.2±2.4% ，占痛刺激激活神经元的 27.1±2.2% ，占痛痒双标神经元 的45.3±2.0% 。 综上所述，PFA 和CQ 分别引起的痛觉和痒觉信号在脊髓中的传导既有各自 的特异性通路，也有共用通路。此外，本项研究发现，GRPR 不但在痒觉传导过 程中起重要作用，而且也参与了痛觉信号在脊髓的传导和加工。该研究让我们进 一步了解痛觉和痒觉的脊髓传导机制，为这两种刺激相关疾病的临床治疗提供了 一定的实验基础。 关键词：痛觉、痒觉、c-fos、GRPR 、脊髓 V ABSTRACT Acute pain and itch are important sensations that enable us to detect harmful stimuli, while chronic pain and itch are diseases which can cause long-term physical and psychological suffering. Although peripheral and central pathways of pain and itch have been studied extensively, how these two signals are transmitted and encoded remains unclear. In addition, Gastrin-releasing peptide receptor (GRPR) is thought to play an important role in the itch processing, but whether it is also involved in pain perception has not been thoroughly investigated. In this study, we established an animal model of dual modalities with successive pain and itch stimulations. Taking advantage of the time lag between expressions of mRNA and p