人脱落乳牙牙髓干细胞来源外泌体调节骨髓间充质干细胞生物学特性及其在骨缺损修复中的研究.pdf

目录 中文摘要I Abstract V 常用缩写词中英文对照表 X 前 言 1 第一部分 人脱落乳牙牙髓干细胞 （SHED）来源的外泌体提取和鉴定 2 1 材料与方法 2 1.1 实验材料 2 1.2 实验细胞 2 1.3 实验方法 3 1.3.1 SHED 细胞培养 3 1.3.2 SHED 来源外泌体的分离 3 1.3.3 SHED 来源外泌体的鉴定 4 1.3.3.1 透射电子显微镜（TEM ） 4 1.3.3.2 Western blot 4 2 结 果 7 2.1 SHED 形态学特征 7 2.2 SHED-Exos TEM 结果 7 2.3 SHED-Exos Western blot 结果 8 3 讨 论 9 4 结 论 12 第二部分 SHED-Exos 调节骨髓间充质干细胞（BMSCs）生物学特性的探究 13 1 材料与方法 13 1.1 实验材料 13 1.2 实验细胞 14 1.3 实验方法 14 1.3.1 小鼠BMSCs 分离和培养 14 1.3.2 检测BMSCs 多向分化能力 15 1.3.2.1 成骨分化 15 1.3.2.2 成脂分化 15 1.3.3 配制无外泌体血清培养基 16 1.3.4 SHED-Exos 对 BMSCs 增殖和凋亡的影响 16 1.3.4.1 CCK-8 实验检测细胞增殖 16 1.3.4.2 Annexin V - FITC / PI 双染检测细胞凋亡 16 1.3.5 成骨分化实验 17 1.3.5.1 配制各组成骨培养基 17 1.3.5.2 碱性磷酸酶 （ALP ）测定 17 1.3.5.3 茜素红染色和定量 17 1.3.5.4 qRT-PCR 检测成骨基因表达 17 1.3.5.5 Western blot 检测成骨蛋白表达 19 1.3.6 成脂分化实验 20 1.3.6.1 油红O 染色及定量 20 1.3.6.2 qRT-PCR 检测成脂基因表达 20 1.3.7 脂多糖（LPS ）诱导炎症实验 20 1.3.8 统计学分析 21 2 结 果 22 2.1 BMSCs 分离和培养 22 2.2 BMSCs 多向分化能力鉴定 22 2.3 SHED-Exos 对BMSCs 增殖和凋亡影响 23 2.3.1 BMSCs 细胞增殖检测 23 2.3.2 BMSCs 细胞凋亡检测 24 2.4 SHED-Exos 对BMSCs 成骨分化能力的影响 24 2.4.1 碱性磷酸酶活性测定 24 2.4.2 矿化基质染色（茜素红染色）和定量 25 2.4.3 qRT-PCR 检测成骨相关基因表达 26 2.4.4 Western blot 检测成骨相关蛋白表达 27 2.5 SHED-Exos 对BMSCs 成脂分化能力的影响 27 2.6 SHED-Exos 对脂多糖（LPS ）诱导的 BMSCs 炎症相关因子表达调控 29 3 讨 论 30 4 结 论 33