12废物资源化生物可降解塑料汇编.pptVIP

31 ? 胞中积累的 PHAs 存在形式 ? 以 单个粒子的形态 存在，每个细胞含有的颗粒 数量的大小随微生物种类而不同，在 Ralstonia eutropha 中，每个细胞含有 8-10 个颗粒，每个颗 粒直径大小为 0.2- 0.5μm ； ? 以 非晶体形式 存在。具有高度的折光性，颗粒 外面包裹着一层膜，没有生物膜那样的典型双 层结构，膜中含有 PHAs 合成酶的降解酶系统。 32 Scanning electron microscope of PHB granules in Ralstonia eutropha 33 补料分批培养 45h 收获的菌体 细胞的电镜照相 34 PHAs 的代谢途径 ? 不同微生物合成 PHAs 的途径不同，基质不同其合成途径 也有差异。 ①真养产碱杆菌及多数细菌从糖合成 PHB ； ②深红红螺菌从糖合成 PHB ； ③食油假单孢菌等从链烃、醇及酸合成具有与基质链长有关的 HA 单 位的 PHAs ； ④一株产碱杆菌从长链偶碳脂肪酸合成 PHB ； ⑤铜绿假单孢菌等从糖质碳源 ( 如葡萄糖酸 ) 合成具中链 HA 单位的 P HAs ； ⑥真养产碱杆菌等利用糖加丙酸合成 PHBV 。 35 基因重组细菌 ? 20 世纪 80 年代后期开始将重组 DNA 技术应用于生物合 成 PHB ，来自于多种细菌的 PHA 生物合成酶 —— PHA 生 物合成途径的关键酶，已被在分子水平进行了详细的研 究， PHA 生物合成酶基因已被克隆成功。 ? 3 个实验室独立地将真养产碱杆菌 H16 的 PHB 生物合成基 因 phbA 、 phbB 和 phbC 克隆并在大肠杆菌中表达。 36 （三） PHAs 的发酵生产 ? PHAs 实现大规模工业化生产的主要障碍是生产成本。 英国帝国化学公司 (ICI) 认为影响 PHAs 生产成本的主要 因素有 ? 菌种 ? 原料 ? 操作方式 ? 提取方法 37 因而降低 PHAs 的生产成本主要措施 ? (1) 采用廉价基质 ( 如 CO 2 、 H 2 和 O 2 ，甲醇，乙醇，葡萄 糖及来自农业废物的有机酸等 ) 和提高产物对基质的产 率系数，降低发酵原材料的成本； ? (2) 提高生产强度 ( 如选育高产菌株、采用合适的发酵生 产方式等 ) ，以降低操作成本； ? (3) 改进提取、纯化技术 ( 如不采用价格昂贵的有机溶剂、 简化操作等 ) ，以降低提取成本。 38 PHAs 的流加发酵 ? 在 PHAs 的生产中，通常采用分批发酵法和流加发酵法，有时用连续 培养法来获得高的生产强度。 ? 由于 Ralstonia eutropha 只有在某种营养成份氮、磷或氧等缺乏而碳 源过量的不平衡生长条件下才能大量积累 PHAs ，一般可将发酵过程 分成两个阶段来进行控制： ? 第一阶段为菌体细胞的形成阶段，在此阶段微生物利用基质形成 大量菌体，而多聚体 PHAs 的积累量很少； ? 第二阶段为多聚体形成阶段，当培养基中某种营养耗尽时，细胞 进入 PHAs 形成阶段，在此阶段 PHAs 大量形成而菌体细胞基本上不 繁殖。 39 ? 延长细胞的 对数生长期 ，从而可获得较高的菌体浓度； ? 减少菌体细胞在生长阶段积累多聚体，也需通过流加法来 控制培养液中氨离子浓度不小于 200 mg/L ，否则会降低共 聚体的最终产率。 ? 在多聚体形成阶段， 限制氮源 能刺激细胞积累 PHAs ，但氮 源的完全缺乏会极大地损害微生物细胞的合成活性，所以 将在 PHAs 合成阶段以较低的速率限量流加氮源。 PHAs 的流加发酵 40 （四） PHAs 的提取技术 ? 有机溶剂法 ? 次氯酸钠提取法 ? 酶法 ? 表面活性剂 - 次氯酸钠法 ? 其他方法 41 1. 有机溶剂法 ? 对于由真养产碱杆菌 ( Ralstonia eutropha ) 生产 PHB ，研 究初期通常采用的提取方法是有机溶剂法。包括 : 氯 仿、二氯乙烷、 1,1,2 — 三氯乙烷、乙酸酐、碳酸乙烯 酯及碳酸丙烯酯等。 ? 原理：有机溶剂一方面能 改变细胞壁和膜的通透性 ， 另一方面能使 PHB 溶解到溶剂中，而非 PHB 的细胞物 质 (NPCM) 不能溶解，从而将 PHB 与其它物质分离开来。 42 有机溶剂提取 PHB 的过程示意图 43 (1) 当溶剂中含有超过 5%(w/v) 的 PHB 时，溶液变得很粘，要 去掉细胞的残余物就变得很困难； (2