毒死蜱污染土壤的固定化微生物强化修复研究.pdfVIP

符号说明 amoA: ammonia monooxygenase, 氨单加氧酶 Amp ：Ampicillin, 氨苄青霉素 AOA: Ammonia Oxidizing Archaea, 氨氧化古菌 AOB: Ammonia Oxidizing Bacteria, 氨氧化细菌 AWCD: Average Well Color Development, 平均颜色变化率 BLAST ：The Basic Local Alignment Search Tool, 局部序列排比检索基本工具 bp: base pair, 碱基对 CP ：chlorpyrifos, 毒死蜱 DNA ：Deoxyribonucleic Acid, 脱氧核糖核酸 PCR: Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应 RT-PCR: Real-time quantitative PCR, 实时荧光定量PCR SPSS: Statistical Product and Service Solutions, 统计产品与服务解决方案 T-RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism, 末端限制性片段长度多态性 X-Gal ：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside ,5-溴-4 氯-3-吲哚-β-D 半乳糖 苷 目 录 摘要I Abstract III 1 前言 1 1.1 农药使用概况 1 1.2 毒死蜱概况 1 1.2.1 毒死蜱使用概况 1 1.2.2 毒死蜱在环境中的残留 2 1.2.3 毒死蜱的生态毒理学效应 2 1.3 农药污染土壤修复方法 3 1.3.1 非生物修复方法 3 1.3.2 生物修复方法 4 1.4 固定化修复技术 6 1.4.1 固定化微生物技术的修复原理 6 1.4.2 固定化微生物技术的应用 6 1.4.3 生物炭做为固定化载体的应用 6 1.5 污染土壤修复过程中对土壤微生物的影响 7 1.6 研究方法、内容和技术路线 8 2 材料与方法 10 2.1 实验药品 10 2.2 实验仪器 10 2.3 供试材料 11 2.3.1 实验土壤及其理化性质 11 2.3.2 主要试剂和培养基的配制 11 2.4 实验方法 12 2.4.1 无机盐培养基中毒死蜱的提取和测定 12 2.4.2 固定化降解菌的制备 13 2.4.3 固定化降解菌载体吸附的菌量 13 2.4.4 固定化条件优化 14 2.4.5 毒死蜱初始浓度对固定化降解菌去除效果的影响 14 2.4.6 固定化降解菌投加量对毒死蜱去除率的影响 15 2.4.7 固定化降解菌的去除效果 15 2.4.8 土壤降解实验 15 2.4.9 微生物功能多样性测定 16 2.4.10 末端限制性片段长度多样性 17 2.4.11 土壤功能微生物基因表达丰度的分析 18 2.5 数据统计与分析 22 3 结果与分析 24 3.1 分析方法的线性关系与准确性 24 3.2 降解菌的固定化以及对毒死蜱的去除特性 25 3.2.1 固定化条件的优化 25 3.2.2 毒死蜱初始浓度对固定化降解菌去除毒死蜱效果的影响 26 3.2.3 固定化降菌投加量对降解效果的影响 27 3.2.4 固定化降菌的降解效果对比 28 3.3 固定化降解菌对毒死蜱污染土壤的修复研究 29 3.3.1 固定化降解菌对土壤中毒死蜱的去除效果 29 3.3.2 固定化降菌率修复土壤后对土壤微生物Biolog 分析 30 3.3.3 固定化降菌修复土壤后对土壤微生物T-RFLP 分析 34 3.3.4 固定化降菌修复土壤后对土壤氨氧化微生物基因表达丰度的影响 35 4 讨论 38 4.1 生物炭固定化降解菌的优势 38 4.1.1 固定化降解菌固定条件优化 38 4.1.2 接种量和毒死蜱初始浓度对固定化降解菌去除效果的影响 38 4.2 固定化降解菌的土壤修复效果 39 4.2.1 固定化降解菌对污染物的高效降解作用 39 4.2.2 固定化降解菌修复土壤过程中对土壤微生物的影响 40 5 结论 42 6 创新之处与研究不足 43 参考文献 44 致谢 52 攻读学位期间发表论文情况 53 山东农业