禾谷镰刀菌类动力GTP酶FgSey1功能研究.pdfVIP

符号说明 Amp+: Ampicillin, 氨苄青霉素 CA: Carrot agar, 胡萝卜培养基 cDNA: complementary DNA, 互补脱氧核糖核酸 CMC: Carboxymethyl cellulose, 羧甲基纤维素 CTAB: Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide, 十六烷基三甲基溴化铵 ddH O: Double distilled water ，双蒸水 2 DEPC: Diethylpyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯 DNA: Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 DON: Deoxynivalenol, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 ER: Endoplasmic reticulum, 内质网 FHB: Fusarium head blight, 小麦赤霉病 G418: Geneticin, 遗传霉素 GAPDH: Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 GTP: Guanosine triphosphate, 鸟嘌呤-5-三磷酸 LB: Luria-bertani medium, LB 培养基 LD: Lipid droplet , 脂滴 PCR: Polymerase chain reaction, 聚合酶链式反应 PDA: Potato dextrose agar, 马铃薯培养基 PEG: Polyethylene glycol, 聚乙二醇 qRT-PCR: Quantitive real-time polymerase chain reaction, 实时荧光定量PCR RER: Rough endoplasmic reticulum, 粗面内质网 RNA: Ribonucleic acid, 核糖核酸 RnaseA: Ribonuclease A, 核糖核酸酶A RT-PCR: Reverse transcriptase polymerase chain reaction, 反转录PCR SER: Smooth endoplasmic reticulum, 滑面内质网 SDS: Sodium dodecyl sulfate, 十二烷基硫酸钠 目 录 中文摘要I Abstract III 1 前言 1 1.1 禾谷镰刀菌概述 1 1.1.1 生物学特征 1 1.1.2 致病代谢产物-脱氧雪腐镰刀菌烯醇 2 1.1.3 禾谷镰刀菌基因组学研究状况 2 1.2 小麦赤霉病 3 1.2.1 小麦赤霉病的症状及病害循环 3 1.2.2 小麦赤霉病的防治 4 1.3 内质网 4 1.3.1 内质网的功能 4 1.3.2 内质网的结构 5 1.3.3 动力蛋白超家族简介 5 1.3.4 动力蛋白家族成员Sey1 的研究进展 5 1.4 研究的目的和意义 6 2 材料和方法 8 2.1 实验材料 8 2.1.1 主要软件和生物学数据库 8 主要软件工具 8 主要生物学数据库 8 2.1.2 供试菌株和载体 8 2.1.3 主要的实验工具酶与试剂 8 2.1.4 主要培养基、试剂配方 9 主要培养基配方 9 主要试剂配方 13 2.1.5 PCR 引物 16 2.2 实验方法 18 2.2.1 禾谷镰刀菌类动力三磷酸鸟苷酶（SEY1 ）的生物信息学分析 18 2.2.2 禾谷镰刀菌PH-1 菌株的保存 19 2.2.3 禾谷镰刀菌DNA 、RNA 的提取以及RNA 的逆转录 19 CTAB 法提取禾谷镰刀菌基因组DNA 19 Trizol 法提取禾谷镰刀菌基因组RNA 20 禾谷镰刀菌基因组RNA 体外逆转录 21 荧光定量PCR 22 2.2.4 禾谷镰刀菌FgSEY1 基因敲除片段的扩增和连接 22 目的片段的扩增 22 overlap PCR 连接并扩增敲除片段 24 2.2.5 原生质体制备和转化 24 2.2.6 验证敲除转化子 25 PCR 验证敲除转化子 25 Southern blot