桑树应激响应A_B桶状结构域蛋白HS1基因的功能研究.pdfVIP

符 号 说 明 Amp: Ampicillin, 氨苄青霉素 Kan: Kanamycin, 卡那霉素 RFP: Rifampicin, 利福平 bp: Base pair, 碱基对 CTAB: Cetyl trimethylammol lonium bromide, 十六烷基三甲基溴化铵 NCBI: National centre for biotechnology information, 美国国立生物技术信息中心 BLAST: Basic local alignment search tool, 基本局部比对查询工具 ddH O: Distilledant deionized water, 重蒸去离子水 2 LB: Luria-bertani medium, LB 培养基 PDA: Potato dextrose agar, 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 dNTP: Deocy-ribonucleoside triphosphate, 脱氧核糖核苷三磷酸 Pst . DC3000: Pseudomonas syringae pv. Tomato DC3000, 丁香假单胞菌番茄致病变种 Tris: Ttrishydryxymethy laminomethane, 三羟甲基氨基甲烷 EDTA: Ethylene diamine tetracetic acid, 乙二胺四乙酸 PCR: Polymerase chain reaction, 聚合酶链式反应 qRT-PCR: Real time quantitative reverse transcription PCR, 实时定量反转录PCR ZIP: Zinc transporter protein, 锌转运蛋白 HSP: Heat shok protein, 热激蛋白 PR: Pathogenes-related protein, 病程相关蛋白 LEA: Late embryogenesis abundant, 胚胎发育晚期丰富蛋白 WT: Wild type, 野生型 OE: Over expression, 过表达株系 GFP: Green fluorescent protein, 绿色荧光蛋白 JA: Jasmonic acid, 茉莉酮酸 SA: Salicylic acid, 水杨酸 IAA: Indoleacetic acid, 生长素 ABA: Abscisic acid, 脱落酸 目录 中文摘要I Abstract III 1 前言 1 1.1 应激响应蛋白研究进展 1 1.1.1 植物应激蛋白的主要类型 1 1.1.2 植物应激蛋白的功能 5 1.2 热稳定蛋白研究进展 6 1.2.1 热稳定蛋白的主要类型及特点 6 1.2.2 热稳定蛋白的功能 8 1.3 研究的目的意义 9 2 材料与方法 10 2.1 材料与仪器 10 2.1.1 植物材料 10 2. 1.2 菌株和载体 10 2.1.3 试剂 10 2.1.4 PCR 引物 11 2.1.5 主要仪器 11 2.2 方法 12 2.2.1 桑树叶片RNA 的提取 12 2.2.2 cDNA 的合成 13 2.2.3 Mul-HS1 基因的PCR 扩增及生物信息学分析 14 2.2.4 Mul-HS1 植物表达载体的构建 16 2.2.5 农杆菌GV3101 感受态的转化 18 2.2.6 拟南芥的侵染和转基因植株的筛选与鉴定 18 2.2.7 Mul-HS1 基因的荧光定量PCR 20 2.2.8 Mul-HS1 蛋白质的亚细胞定位观察 20 2.2.9 转Mul-HS1 基因植株表型分析 20 2.2.10 转Mul-HS1 基因植株的抗病性分析 20 2.2.11 Mul-HS1 互作蛋白预测及分析 22 2.2.12 Mul-HS1 启动子克隆及信息学分析 22 2.2.13 启动子植物表达载体构建及农杆菌转化 23 2.2.14 启动子的诱导表达特性分析 23 3 结果与分析 25 3.1 桑树Mul-HS1 基因的克隆及生物信息学分析 25 3.1.1 Mul-HS1 基因克隆 25 3.1.2 Mul-HS1 蛋白的氨基酸组成及结构预测 25 3.1.3 Mul-HS1 蛋