BpMBF1窄冠白杨1号遗传转化及转基因株系抗寒性研究.pdfVIP

符 号 说 明 Kan ：Kanamycin 卡纳霉素 TMT ：Timentin 特美汀 Rif ：Rifampicin 利福平 ABA ：Abscisic Acid 脱落酸 6-BA ：6-Benzylaminopurine 6-苄基腺嘌呤 IBA ：1h-indole-3-butanoic acid 吲哚丁酸 NAA ：1-naphthylacetic acid 萘乙酸 EDTA-Na2 ：Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt 乙二胺四乙酸二钠 SOD：Superoxide dismutase 超氧化物歧化酶 POD ：peroxidase 过氧化物酶 DNA ：Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 RNA ：Ribonucleic Acid 核糖核酸 PCR ：Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 RT-PCR ：Real-time Quantitative polymerase chain reaction 实时荧光定量 ATP:Adenosine triphosphate 腺嘌呤核苷三磷酸 cDNA:complementary DNA 互补DNA LB ：LB Culture LB 培养基 PCR:Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 Bp ：BpMBF1 目 录 中 文 摘 要 I Abstract III 1.前言 1 1.1 杨树 1 1.2 低温胁迫对植物的危害 1 1.3 植物对低温的响应机制 3 1.3.1 植物的生理生化调节系统 4 1.3.2 植物的抗冻蛋白 6 1.3.3 植物的抗寒转录因子及调节因子 7 1.4 MBF1 转录因子研究进展及其与植物抗寒性的关系 8 1.5 测序技术的研究进展 10 1.5.1 测序技术的发展 10 1.5.2 转录组测序概述 11 1.5.3 转录组测序在植物中的应用 11 1.6 本研究的目的与意义 12 2.材料与方法 13 2.1 试验材料 13 2.1.1 植物材料 13 2.1.2 酶与生化试剂 13 2.1.3 菌株 14 2.1.4 仪器设备 14 2.2 试验方法 14 2.2.1 BpMBF1 农杆菌的制备及植株的转化 14 2.2.2 转基因植株的抗寒性鉴定 16 2.2.3 转基因植株的生理生化指标鉴定 17 2.2.4 转录组测序 19 3 结果与分析 24 3.1 BpMBF1 转基因植株 24 3.1.1 BpMBF1 转基因植株的获得 24 3.1.2 BpMBF1 转基因植株的PCR 检测 25 3.1.3 BpMBF1 转基因植株的表达量分析 25 3.1.4 低温胁迫下转基因植株表型变化分析 26 3.2 转基因植株的生理生化指标鉴定及分析 27 3.2.2 转基因植株叶片中可溶性糖含量的影响 27 3.2.3 转基因植株叶片中可溶性蛋白含量的影响 28 3.3 转录组测序结果分析 29 3.3.1 转录组测序与序列组装 29 3.3.2 差异表达基因分析 30 3.3.3 差异表达基因GO 富集分析 33 3.3.4 差异表达基因KEGG 通路分析 35 3.3.5 差异表达基因中与抗寒相关的转录因子 37 4.讨论 38 4.1 低温胁迫下转基因杨树的生理生化响应 38 4.2 转基因植株的转录组测序 38 5.结论 42 6.参 考 文 献 43 7.致谢 53 8.攻读学位期间发表的学术论文情况 54 山东农业大学硕士专业学位论文 中 文 摘 要 林木是一种重要的可再生资源，在保护环境和维持环境平衡方面发挥着重要 作用。杨树是我国乃至全世界种植面积最广，适应性最强的树种之一。然而，在 温度极低的东北地区，杨树的受冻情况依然严重。为了更好地推广杨树的应用， 拓宽杨树的适用范围，杨树的抗寒胁迫育种工作，也逐渐成为目前育种工作的重 要内容。针对以往杨树存在的抗寒性问题，运用生物分子技术发现与抗寒性相关 的基因，并利用基因工程技术培育杨树抗寒新品种，将会为林业及全球