酶底物法(科立得)产品培训.pptxVIP

微生物检测的重要性地震等自然灾害过后水体中会被大量微生物所污染，特别是粪便污染，如水体中含有肠道病原菌株，并被人饮用则会爆发严重疾病如泌尿系感染、菌血症和脑膜炎，少数肠道病原菌株可引起急性腹泻。通常人们用投放含氯消毒剂进行消毒，但消毒效果如何还需要通过检测水体中是否含有总大肠菌群和大肠埃希氏菌来判断。指示菌的方法学定义总大肠菌群（Total Coliforms) 大肠菌群系指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指标菌的一般特征故以此作为粪便污染指标评价饮水的卫生质量。耐热大肠菌群(Thermotolerant Coliforms) ，原名：粪大肠菌群（Fecal Coliforms ) 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为粪大肠菌群。是水体受人畜粪便污染的比较直接指标。大肠埃希氏菌（大肠杆菌，E.Coli.) 大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈黄色，能产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的细菌。大肠埃希氏菌是粪大肠菌群的组成部分，是水体受人畜粪便污染的最直接指标，水中含有大肠埃希氏菌提示有粪便污染。 背景知识大肠菌群，耐热大肠菌群，大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌耐热大肠菌群大肠菌群目前的粪大肠菌群检测方法是实际上是检测耐热大肠菌群而不是大肠埃希氏菌。有关文献报道的试验结果表明, 有15%的阳性耐热粪大肠菌群实际上属于总大肠菌群而不是大肠埃希氏菌。这种情况的发生多数是由于耐热的克雷伯氏菌普遍存在于自然环境中，而非来源于人畜粪便，因此与人类疾病的产生也没有绝对的关联。同时，（用上述方法检测）会有10%的假阴性结果，是因为大肠埃希氏菌属有10％不会产气（注1）。注1：目前的粪大肠菌群检测方法，产酸产气是预试验的阳性判断指标。粪便污染指示菌比较 总大肠菌群耐热(粪)大肠菌群大肠埃希氏菌肠球菌亚硫酸盐还原菌 包含菌属埃 希 氏 菌 属 、 柠 檬 酸 菌 属 、 克 雷 伯 菌 属 、 肠 杆 菌 属 （ 也 包 括 沙 雷 菌 属 和 哈 夫 尼 亚 菌属） 主 要 是 埃 希 氏 菌 属 和 耐 热 克 雷 伯 菌 属 大肠埃希氏菌 粪肠球菌、屎肠 球菌、耐久肠球 菌和海氏肠球菌 等 亚硫酸盐还原菌 来源可 来 自 人 畜 粪 便 ， 环 境 中 自 然 存在 主 要 来 自 于 温 血 动 物 粪 便 ， 也 可 来 自环境 主要来自温血 动物和人的粪 便 主要来自温血动 物和人的粪便 主要来自温血动 物和人的粪便 作为粪便污染指示菌的意义 水处理的指示菌 ,不能作为消毒效果的指示菌 比较直接的指示菌 指示粪便污染 的 最 理 想 指 标、作为消毒 效果的指示菌 用于输配水系统 维修后或新输配 水管线铺设后水 质的检测、用于 饮用水中大肠杆 菌检测有争议的 粪致病菌指标 为间歇性粪便污 染的指标、过滤 效果评价的指标 我国水质微生物指标(细菌) 标准指标菌检测量GB5749-2006,生活饮用水标准菌落总数,总大肠菌群, 大肠埃希氏或菌耐热大肠菌菌落总数:1ml;大肠菌100mlCJ/T206—2005城市供水水质标准细菌总数, 总大肠菌群、耐热大肠菌细菌总数1ml,总大肠菌群/耐热大肠菌群:100mlGB3838-2002,地表水环境质量标准粪(耐热)大肠菌群1LGB/T 14848-93地下水质量标准GB 9667-1996,游泳场所卫生标准细菌总数、总大肠菌群细菌总数 1ml;总大肠菌群1L检测方法多管发酵法（Multiple Tube Fermentation, MTF)滤膜法（Membrane Filtration, MF )固定底物技术酶底物法(Defined Substrate Technology, DST) 酶底物法( Enzyme Substrate Test, EST) 检测方法多管发酵法（MTF）–共需3-5天时间以100mL水样中大肠菌最可能数(most probable number, MPN)表示 培养基制备试管培养（22－26小时） 阴性结果（无产酸，产气） 产酸，产气 平板培养18－24小时 革兰氏染色，镜检 观察菌落形态，挑取特征菌落 证实试验（培养24±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在 ）检测方法滤膜法（membrane filtration,MF )