常用微生物染的方法.pptVIP

常用微生物染色方法 泰兴市人民医院检验科微生物室刘鸿丽  1、革兰染色 2、抗酸染色 3、墨汁染色  革兰氏染色  草兰氏染色原理 通透性学说 二等电点学说 三化学学说  LPS 磷壁酸 肽聚糖层 磷脂层 G-/G+细菌细胞壁比较示意图  革兰氏阳性菌细胞壁结构比较 原理 致密,肽聚糖层很厚,脂类含量 通透性学说较少,酒精不易渗入,而且95% 咆酒精可使细胞壁脱水,间隙变小 学通透性降低,阻碍结晶紫-碘复合 物渗出; 革兰氏阴性菌细胞壁结构比较 疏松,肽聚糖层很薄,外膜、脂 蛋白、脂多糖均含有大量脂质, 易被酒精溶解,致使细胞壁通透 性增高,细胞内的结晶紫碘复合 物被酒精溶解洗出而脱色  原理 革兰氏阳性菌等电点(pH2 学说3)比革兰氏阴性菌等电点 等电点学说(pH45)低,加之媒染剂 化学学说 碘为弱氧化剂能降低革兰氏 阳性菌的等电点,因此在同 样的pH的染色环境中,阳性 菌所带负电荷比阴性菌多, 与带正电荷的结晶紫染料能 牢固结合,不易被酒精脱色  原理 逦透性学说 革兰氏阳性菌含有大量核糖 等电点学说 核酸镁盐,其可与结晶紫-碘 三化学学说结合成大分子复合物,因而 不易被95%酒精脱色;而阴 性菌中此物质含量较少,因 而吸附染料量很少,分子量 也较小,故易被酒精脱色  细菌涂片的制备 涂片:取一张洁净载玻片,用已灭菌的接种环取一环 生理盐水于玻片中央,再将接种环灭菌,取菌与生理 盐水磨匀,涂布成1cmⅹ1cm大小区域的均匀薄膜,使 盐水磨成灰白色为宜,接种环灭菌后放回试管架 干燥:涂片最妤在室温下自然干燥或将标本片涂抹面 向上,置酒精灯火焰上半尺高处慢慢烘干。 ■固定:常用火焰加热法,手执载玻片一端,标本面向 上,迅速来回通过火焰三次。  注意点 1取菌量不可太多,涂片应均匀,否则影响染色结果 2.千燥时切忌高热,以免细菌变形 3.固定时温度不可过高时间不可长,以防涂抹面 烧焦及玻片烧裂 固定的目的 杀死细菌,使菌体蛋白凝固,染料易于着色 改变细菌通透性,以利于染料进入细胞内 使菌体与玻片粘附牢固,在染色时不致被染 料和水冲掉