食品理化检验技术 脂溶性维生素 A、E的含量的测定 2维生素的测定方法.pptxVIP

食品理化检验技术维生素的测定主讲教师：江苏农林职业技术学院 徐银四三一二维生素基础知识维生素的测定方法脂溶性维生素的测定水溶性维生素的测定过渡页TRANSITION PAGE脂溶性维生素的测定方法维生素A的测定维生素D的测定一、维生素A的测定维生素在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑可生成蓝色可溶性络合物，在620nm 波长处有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。 此法为国标的第二法。 1.测定原理脂溶性维生素的测定一、维生素A的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论皂化法：适用于维生素A含量不高的样品样品处理标准曲线制备 ③样品测定 研磨法：适用于维生素A含量大于5-10ug的样品维生素A标准系列+1mL三氯甲烷+1d乙酸酐，放在620nm处，+9mL三氯化锑-三氯甲烷溶液，6s内测定吸光度1mL样液+ 1mL三氯甲烷+1d乙酸酐，放在620nm处，+9mL三氯化锑-三氯甲烷溶液，6s内测定吸光度脂溶性维生素的测定一、维生素A的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论X-样品中维生素A含量，mg/100g；ρ-由标准曲线上查得维生素A的含量，ug/mL；m-样品质量，g；V-提取维生素A后加三氯甲烷定容的体积，mL。脂溶性维生素的测定一、维生素A的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论本法摘自GB5009.82-2003，适用于食品中维生素A的测定。三氯化锑有腐蚀性，不能粘在手上。三氯化锑与水能生成白色沉淀，所以不能碰到水三氯化锑与维生素A生成蓝色物质很不稳定，要在6S内完成吸光度的测定，否则蓝色反应逐渐消失，使结果偏低。脂溶性维生素的测定二、维生素D的测定1.测定原理2.操作方法3. 讨论 试样在焦性没食子酸保护下皂化，用石油醚萃取不皂化物，萃取物经正相色谱柱分离富集，再用反相色谱柱进一步分离，紫外检测器测定，与标准试样比较定量。 此法是目前分析维生素D的最好方法，灵敏度高、分析速度快，是我国国标GB/T5413.9-1997和AOAC995.05所采用的方法。 脂溶性维生素的测定二、维生素D的测定反相C18 柱检测1.测定原理2.操作方法3. 讨论 样品处理正相硅胶柱富集推荐HPLC条件色谱柱：4.6mm×25cm C18柱；流动相：甲醇；流速：1mL/min；柱温：20℃检测波长：265nm样液+2%焦性没食子酸乙醇，混匀，+75%KOH，回流皂化，冷却后转移入分液漏斗，用石油醚反复萃取，浓缩+1mL正丁烷溶解备用。脂溶性维生素的测定推荐HPLC条件色谱柱：4mm×30cm，硅胶柱；流动相：正己烷与环己烷1:1混合，并按体积分数0.8%加入异丙醇；流速：1mL/min；柱温：20℃检测波长：265nm二、维生素D的测定1.测定原理2.操作方法3. 讨论本法适用于食品、强化食品及饲料中维生素D含量的测定。本法不区分维生素D2和维生素D3，测定的是总维生素D含量。维生素D含量的表示可用质量mg/100g，也可用国际单位，1国际单位相当于0.025ug的维生素D。脂溶性维生素的测定3过渡页TRANSITION PAGE维生素B1的测定维生素C的测定水溶性维生素的测定方法一、维生素B1的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素，在紫外光照射下，硫色素发出蓝色荧光，在给定的条件下以及没有其他荧光物质干扰时，其荧光强度与硫色素的含量成正比。 反应式如下： 氢氧化钠 硫胺素 硫 色 素铁氰化钾水溶性维生素的测定激发波长365nm狭缝5nm 发射波长435nm 狭缝5nm 吸取20-80mL提取液置于转好人造沸石的盐基交换管中，用热的酸性氯化钾洗脱，收集洗脱液。同时做标准硫胺素应用也的吸附和洗脱对照。一、维生素B1的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论取A、B两个反应瓶，各加5mL试样净化液，0.15g/mL氢氧化钠溶液，B瓶中加3mL碱性氯化钾，同条件下振摇，各加10mL正丁醇。同样做标准硫胺素应用也的氧化和萃取。水溶性维生素的测定测 定氧化净化提取试样+0.3moL/L盐酸，置于103kPa压力锅中水解，冷却后调pH4.5+淀粉酶，使硫胺素游离出来。一、维生素B1的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论X-样品中硫胺素含量，mg/100g；U-试样荧光强度； Ub-空白试样荧光强度；S-标准荧光强度； Sb-标准空白荧光强度；ρ-硫胺素标准应用浓度，ug/mL； V-用于净化的硫胺素标准应用液体积mL； V1-试样水解后定容的体积mL；V2-试样用于净化的提取液体积mL；m-样品质量，g水溶性维生素的测定一、维生素B1的测定1.测定原理2.操作方法3.结果计算4.讨论本法摘自GB