实验七 微生物分离培养和菌种保藏.ppt

实验七 微生物的分离、培养和菌种保藏 生物的分离、培养和菌种保藏 目的要求 实验材料 试验程序 思考题 目的要求 初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏 的基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术, 掌握无菌操作技术 实验材料 样品:新鲜土壤 培养基:灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养 基、马铃薯蔗糖培养基(10mL装) 无菌水:带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL 无菌水的试管。 其它:无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、 记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水浴锅 试剂:5000U/mL链霉素液 05%重铬酸钾液 实验程序 n微生物的分离 微生物的接种方法(示范) 微生物培养中的氧气条件 微生物的菌种保藏方法 四大类微生物菌落形态的比较和识别 实验程序1 (微生物的分离) n用稀释平板法(又名混菌法)从土壤中分离真 菌 用平板涂抹法分离土壤中的放线菌(土壤稀释 液制备同上)。 用平板划线法分离土壤中的细菌(土壤稀释液 的制备同上)。 实验程序2 (微生物的分离稀释平板法) 制备土壤稀释液:(无菌操作过程见教师示范) 1.称取土壤5g,放入45mL无菌水的三角瓶中,振荡 10min,即为稀释10-1的土壤悬液。 2.另取装有9mL无菌水试管5支,用记号笔编上10-2、10 3、10-4、10-5、10-6。取已稀释成10-1的土壤液,振 荡后静止05min,用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10-2 的无菌水的试管中,并在试管内轻轻吹吸数次,使之充分混 匀,即成10-2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10-4 10-510-6土壤稀释液。 在土壤稀释过程中,应用一支吸管由浓到稀,稀释到底,稀 释方法见图-1。 实验程序3 (微生物的分离—稀释平板法) 依次各1mL 了f官官 无m水每管各9m无的水 琼腊培基 图-1土壤稀释液的制备和稀释液的取样 实验程序4 (微生物的分离一稀释平板法) n平板:每组取培养皿2付,即每个同学做一只。 1先在无菌培养皿底部贴上标签,注明分离菌名、稀释度、组别 班级。 2另取一吸管,以无菌操作法吸取10-4或10-5土壤稀释液1mL, 加在无菌培养皿的一边,在皿的另一边加入2滴5000U/mL的链 霉素液。此时两液严防相混。 3取已熔化的在水浴锅中保温50C左右的马铃薯蔗糖培养基2管, 分别倒入上述培养皿中(见图-2),轻轻转动培养皿,使菌液、 链霉素液、培养基充分混匀铺平,放在平坦的桌面上,凝固后 倒置于28~30°c恒温培养5~6d。观察真菌菌落形态以及计数 菌落。并计算出每g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌 的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。 ■挑取单个菌落,接种到斜面培养基上作纯化和性能测定,若不纯, 需要继续分离。 实验程序5 (微生物的分离一稀释平板法) 图7-2倒平板 图7一3吸管取菌液 a.皿加法b.手持法