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细胞因子检测方法 ●●● ●●●●● 基础医学院微免学系王慧娟 ●●●● ●●●●● ●●●● ●●●● ●●● ●●@ 背景 ●@0●0 ● 0●0 细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要 指标 疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子 治疗监测等 ●●● ●●@ ●@0●0 ● 0●0 (一)依赖性细胞株:生物分析法 ●(二)功能检测:生物分析法 (三)免疫测定:免疫分析法 ●(四)功能测定与抗体抑制 (五)分子杂交技术:mRNA的测定 (六)多聚酶链反应技术(PCR):mRNA的 测定 生物分析法 ●●● ●●●●● ●●●● ●●●●● ●●●● ●●●● ●●● ●●@ (一)依赖性细胞株 ●@0●0 ● 0●0 一些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因子方能 在体外增殖,如DTLL细胞株依赖l2;FDC PL细胞株依赖于小鼠l-3;TF-1细胞株依赖于 人-3和人 GM-CSF,因而可利用这些依赖细 胞株检测相应的细胞因子。这种方法敏感性高, 特异性也不错,但可异的是并非所有细胞因都 能找到相应的细胞株,因而限制了它的应用。 ●●● ●●@ (二)功能检测 ●●0● ● 0●0 ●利用一些细胞因子的功能特性,可建立相应的 活性测定方法,如干扰素的抑制病毒感染效应 肿瘤坏死因子对L929细胞的杀伤作用等。这样 的方法敏感性高,但特异性不够,容易受一些 扰因素的影响。 免疫分析法 (1)放免实验(RA) ●●● ●●●●● (2)酶联免疫吸附实验(ELA)· ●●●●● ●●●● ●●●● mRNA的测定 (1)分子杂交实验 ●●● ●●●●● (2)逆转录PcR( RT-PCR) ●●●● ●●●●● ●●●● ●●●● ●●● ●●@ 小结 ●@0●0 ● 0●0 ●生物学检测法比较敏感,又可直接测定生物学功能, 是最可靠的方法,适用于各种实验目的,是科研部门 最常用的技术,但需要长期培养依赖性细胞株,检测 耗时长,步骤繁杂,影响因素多,不容易熟练掌握。 ●免疫学检测法比较简单,迅速,重复性好,但所测定 的只代表相应细胞因子的量而不代表活性,同时敏感 度也低于生物活性检测法(约低10~100倍) ●分子生物学法只能检测基因表达情况,不能直接提供 有关因子的浓度及活性等资料,主要用于机制探讨。 ●●● ●●@ 影响因素 ●@0●0 ● 0●0 ●原理与方法 ●灵敏度 ●准确度和特异性 ●精密度:免疫分析法的精密度较其生物分析 法有较大提高;批内变异通常为20%~25%, 因此有必要进行2次或3次检测 标准化 生物分析法和免疫分析法结合使用