生物科技行业分子生物学实验.docVIP

（生物科技行业）分子生物学实验 实验操作 1.避免长时间的培养，大肠杆菌壹般培养12个小时就能够挑取克隆子进行验证了。 主要是因为培养时间过长，尤其是含有Amp抗性的质粒。重组菌能够分泌酶降解Amp，造成平板中局部Amp浓度太低。其他未重组菌在Amp存在的情况下只是生长受抑制而非死亡，当Amp浓度降低时就能够生长了。卫星菌落，由于阳性菌落大量分解抗生素，造成周围区域抗生素浓度降低，则无抗性的菌也生长出来了。壹句话，你的板子培养时间过长了。这是amp抗性质粒特有的卫星菌落，就是又抗性的Ecol分泌beta内酰胺酶分解周围的amp，从而使没有抗性的ecoli生长。 2.3.乙醇能够消除核酸的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来。Na＋之类的平衡离子能够和这些带电基团结合，在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。因此只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀。1.为什么用无水乙醇沉淀DNA？ 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是能够任意比和水相混溶，乙醇和核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。壹般实验中，是加2倍体积的无水乙醇和DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代