掺杂量子点的合成及其生物传感应用.pdf

摘要 摘要 题目：掺杂量子点的合成及其生物传感应用 硕士研究生姓名：黄军 导师姓名：孙清江 学校名称：东南大学 量子点由于其独特的性质如高荧光量子产率、宽带吸收、抗光漂白性好的光 学性质，易于电荷/ 能量转移的电子学性质以及表面功能化的化学性质，在生物 医学领域得到广泛的应用。掺杂型量子点通过引入掺杂态离子可以实现单一量子 点的双光发射。代表性的掺杂型量子点包括锰离子掺杂硫化锌（Mn:ZnS）和铜离 子掺杂磷化铟（Cu:InP ），具有长的掺杂剂发射寿命和低的生物毒性等优点，特别 适合于生物传感和成像应用。本论文基于双光发射的Cu:InP 量子点，通过表面 功能化，设计、制备了电荷转移机制的Cu:InP@ligand-PEG 比率荧光探针；结合 核酸等温扩增技术，实现了血清中循环微小miRNA （miRNA ）的可视化微孔板 分析，进一步实现了活细胞中miRNA 的比率荧光成像分析。主要研究内容如下： 1. 通过改进的“连续离子层吸附反应”，合成了双光发射（峰位置分别为530nm 和650nm ）的Cu:InP 量子点。通过调节Cu2+ 的掺杂浓度或壳层包覆时间，实 现了该量子点绿/ 红荧光强度比的精确调控。基于绿/ 红荧光强度比为 1:2 的 Cu:InP 量子点，通过表面聚乙二醇（PEG ）化及超声组装配体（ligand ）分子 如锌卟啉（ZnPPIX ）、5,10,15,20- 四(1- 甲基-4-吡啶基) 卟啉 （TMPyP ）或氯化 血红素（hemin ），制备了多种Cu:InP@ligand-PEG 纳米复合物。通过稳态荧 光和瞬态荧光测量表征了该纳米复合物的光物理性质，结果表明Cu:InP 量子 点的荧光猝灭与卟啉分子的种类与数量均有关，荧光猝灭机制为电荷转移。 2. 利用特异性的配体/DNA 作用，量子点/配体比例为 1:3 的 Cu:InP@TMTyP- PEG 纳米复合物被发展为特异性的双链 DNA 荧光探针。荧光响应实验表明 该探针为比率荧光探针，呈现“绿-黄-红”信号灯式荧光颜色变化，适用于荧 光可视化检测。粒径分析、Zeta 电位测量和细胞毒性等实验表明，该探针同 I 东南大学硕士学位论文 时具有小尺寸、电中性、化学稳定性和生物相容性好的优点，适用于细胞水 平上的分子成像研究。 3. 基于Cu:InP@TMTyP-PEG 荧光探针，实现了人血清中循环miRNA 灵敏、可 视化的微孔板分析。分析过程为：从人血清中提取Total RNA；Total RNA 中 靶标miRNA 触发发夹结构DNA 的链式杂交反应（HCR ），产生长的双链DNA ； Cu:InP@TMTyP-PEG 荧光探针特异性识别靶标miRNA 的HCR 产物，依产 物数量不同呈现信号灯式荧光颜色变化。该可视化微孔板分析实现的循环 miRNA 检测限为 1200 copies/μL ；动态检测范围为4 个数量级。通过该可视 化微孔板分析，实现了正常人及非小细胞肺癌病人血清中三种循环miRNA 的 同时检测。 4. 基于Cu:InP@TMTyP-PEG 荧光探针，实现了活细胞中miRNA 的比率荧光成 像分析。分析过程为：发夹结构DNA 通过脂质体转染进入细胞；细胞质中内 源性miRNA 触发HCR ，产生长的双链DNA ；Cu:InP@TMTyP-PEG 荧光探 针通过细胞内吞进入细胞质；该比率荧光探针特异性识别细胞质中 HCR 产 物并依其数量不同呈现信号灯式荧光颜色变化，具有高分辨优势。通过分步 的比率荧光成像，实现了正常肺细胞/非小细胞肺癌细胞中三种miRNA 的检 测，检测结果与微孔板分析结果一致。 关键词：掺杂量子点；配体；电荷转移；荧光探针；miRNA 检测；微孔板分析； 细胞成像 II