2015版中国药典微生物检验规程.pdfVIP

. 微生物检验规程 1. 实验注意事项 1.1 无菌操作要求 1.1.1 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 1.1.2 专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒 后使用。 1.1.3 接种样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用 75 ％酒精棉球将手 擦干净。 1.1.4 进行接种所用的吸管， 平皿及培养基等必须经消毒灭菌， 打开包装未使 用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼 三次后使用。 1.1.5 从包装中取出吸管时， 吸管尖部不能触及外露部位， 使用吸管接种于试 管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 1.1.6 接种样品、 转种细菌必须在酒精灯旁操作， 接种细菌或样品时， 吸管从 包装中取出后及打开试管塞（即硅氟胶塞）都要通过火焰消毒。 1.1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝， 必要时还要烧到环 和针与杆的连接处。 1.1.8 吸管吸取菌液或样品时， 应用相应的橡皮头吸取， 不得直接用口吸。 1.2 无菌间使用要求 1.2.1 无菌间内应保持清洁，工作后用消毒溶液消毒，擦拭工作台面，不得 存放与实验无关的物品。 1.2.2 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，照射时间不少于 30min ，使 用紫外灯， 应注意不得直接在紫外线下操作， 以免引起损伤， 灯管每隔两周需 用酒精棉球轻轻擦拭， 除去上面灰尘和油垢， 以减少紫外线穿透的影响。 1.2.3 处理和接种样品时， 进入无菌间操作， 不得随意出入， 如需要传递物品， 可通过小窗传递。 1.3 消毒灭菌要求 1.3.1 灭菌前准备 （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿用纸包装严密，如用金 属筒应将上面通气孔打开。 （2 ）装培养基的三角瓶，内容物不应超过总体积的 2/3 （例如 500mL 的三角 瓶最好装 300～350mL培养基，以防再次加热融化时爆沸） 。 （3）无菌室内使用的毛巾、脱脂棉球用纸包裹，进行湿热灭菌。 . . 1.3.2 装放 （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。 （2 ）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品 之间不能过挤。 1.3.3 设备检查 （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2 ）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位， 关好门和盖， 通蒸气或加热后， 观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否 符合于进行灭菌处理的要求。 1.3.4 灭菌处理 (1) 干热灭菌法： 用于玻璃器皿、 金属制品、 陶瓷制品等的灭菌。灭菌完毕后 或温度升温过程中，须在 60 ℃以下才能打开箱门。 (2) 立式压力蒸气灭菌器：待压力恢复到零时，自然冷却至 60℃后开盖取物， 如为液体物品，不要打开排气阀， 而应立即将锅去除热源， 待自然冷却，压力 恢复至零， 温度降