病理常用试剂及染液的配制 .pptVIP

配制苏木精染液所需试剂的作用 ： 甘油：作为稳定剂，延缓苏木精染液蒸发，防止苏木精过度氧化，延长苏木精液的使用期。 冰醋酸：可抵销氧化剂的氧化，使苏木精和苏木红保持均衡。同时又可增加胞核的选择性染色，使胞核染色质显示得清晰细致。 苏木精染色液的配制 改良Lillie-Mayen苏木素染液的配制： A液：苏木素5g充分溶于无水乙醇50ml； B液：硫酸铝钾50g溶于蒸馏水650ml； 稍加热待完全溶解后把二者混合,再依次加 入碘酸钠0.5g、甘油300ml和冰乙酸20ml,苏 木素染液有效期3个月。 苏木精染色液的配制 苏木精染色液的配制 苏木精染液配制是否理想，可从以下几方面检测： 将几滴苏木精染液滴入一小盘自来水内，滴入的瞬间由红色转为紫色再转为紫蓝色慢慢扩散，则该苏木精液配制得好；若在扩散中仍保持红色，则为未足够成熟或陈旧的苏木精染液。 取一块滤纸滴入苏木精染液两滴，苏木精在滤纸上扩散后不久将呈一紫酱色的圆斑，在圆斑的周边最后呈深紫色，这是好的苏木精液。若周边不呈深紫色，说明该染液未够成熟或没有配好。 理想的方法还是在实际操作中染一张淋巴结组织切片，在镜下观察其染色效果。 苏木精染色液的配制 伊红染色液的配制 伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。 先将伊红0.5-1g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸一滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后，可不经水洗直接用85%酒精脱水。 伊红染色液有效期3个月。 伊红染色液的配制 脱钙液的配制 ? 在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。 因此，脱钙是制作骨组织切片的重要环节 用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）除此之外还有电解脱钙法。 强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。但是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。 脱钙液的配制 我们常用的脱钙液配制方法是，先将10%福尔马林10ml倒入80ml蒸馏水中，再加入盐酸10ml即可。 脱钙液的有效期3个月。 脱钙液的配制 * 苏木素（Hematoxylin）与伊红（Eosin）对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的方法。分子量302.288。它是一种无色或淡灰黄色粉末 。在纺织工业上用作丝织物和羊毛的染料。后来，Waldeger(1863)开始用于组织学的染色，苏木精就成为一个十分重要的生物学染色剂。 * 苏木精的氧化有两种方式：然氧化：是指配制苏木精染液时，不加氧化剂，苏木精通过空气和阳光的作用而被自然氧化成苏木红，这过程需数周至数月。这种自然氧化所配制的苏木精染液的保存和使用寿命较长。一种成熟的苏木精染液是苏木精、苏木红、苏木红的活性氧化产物和非活性的超氧化产物的混合物。如过度氧化，可导致大量非活性超氧化产物产生，这些产物是无色和无用的。因此，在配制苏木精染液时，精确地加入恰当的氧化剂和量是重要的。高锰酸钾或过氧化氢 * 理论上，1g苏木精·3H2O完全氧化成苏木红需用碘酸钠185mg，而1g无水苏木精完全氧化则需用碘酸钠218.2mg。Gill提出半氧化苏木精法，即氧化1g苏木精仅用碘酸钠100mg，这样先使部分苏木精氧化成苏木红， * 苏木红为弱酸性，呈红色，对组织的亲和力很小，用单纯的苏木红液染组织，和一般酸性染料一样呈弥漫性染色，且染色浅淡。蓝紫色色淀和带负电荷的胞核脱氧核糖核酸磷酸基进口极性吸着而完成染色。硫酸铝钾又称钾明矾? 硫酸铝铵又称铵明矾? 硫酸铁铵又称铁明矾? ???硫酸钼?????? ?三氯化铁 ?苏木精染液通过加入不同媒染剂配制，或经媒染剂媒染切片后再染苏木精液，可显示不同的组织成份。弹性纤维黑色 （?三氯化铁 ）胶原和粗的网状纤维呈紫至黑色 （磷钼酸 ）纤维素、神经胶质纤维、横纹肌深蓝色 （磷钨酸 ） * 乙二醇：也能较快溶解苏木精，抑制霉菌生长，其沸点高（b.p.197.2℃），苏木精液不易挥发。 * 伊红酒精液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。 * 在染色、分化过程中发现一些疏松结缔组织,如甲状腺组织、软骨、凝血块及淋巴组织在分化时常常出现脱片的现象 ,把1%盐酸酒精分化溶液中99mIJO%酒精去除,改为99mL的蒸馏水配制成0.5%盐酸水溶液后,在染色、分化