感受态的制备蓝白斑筛选.pptVIP

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2020-09-02 发布于福建
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感受态的制备蓝白斑筛选.ppt

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分孕国常奥感 ■感受态细胞的制备 ■质粒转化入大肠杆菌及初步筛选复习:基因克隆示意图载体NA 性内切酶开目的基因 + 重组体宿主细胞已转化的宿主细胞 ↓繁殖阳性克隆株表达基因克隆操作过程: 分离载体和目的基因分切接转筛限制酶切载体与目的基因拼接重组体转入受体菌筛选重组体基因工程 ◎ 载体外源重组DNA分子 DNA 转化或转染细菌 888 重组DNA增殖细菌在培养液 ○ 中繁殖后在固体培养基生长 ∴:筛选含重组质粒的细菌、感受态细胞及重组体转化重组体转入受体菌转化( transformation) 转染( transfection) 受体细胞转导( transduction) 重组DNA分子导入受体细胞的手段转化是将含有目的基因的质粒导入细菌内进行表达转染是将含有真核生物基因的噬菌体感染细胞; 转导则是指病毒从被感染的细胞(供体释放出来,再次感染另一细胞(受体时),发生供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组。转化方法 CaCl2诱导转化受体细胞电穿孔 PG介导转化特殊处理人工体外包装 ■ 细胞膜特性改变 50-100mmol/L Cacl, 冒② 受体细菌感受态细 ■■■■■■■■■ 重组体转入细菌菌 CaC/处理