时间分的辨荧光免疫剖析技术.pptVIP

体打 时间分辨光免度分析技术 王征 达瑞抗体 标记免疫学分析技术发展历程 免疫荧光分析(oons,1941) 放射免疫分析( Berson和 Yalow,1960) 酶免 ELISA( Engvall,1971 金标免疫分析( Faulk和 Taylor,1971) 化学发光免疫分析( Arakawa,1977 时间分辨荧光免疫分析(oint和 Hemmi la,1979) 电化学发光免疫分析 Leland,1990) 液相芯片(美国 Luminex公司,1997) ⑥电化学光 ⑤时间分辨荧光 ④化学发光 增加反应浓度 ③酶联免疫 酶联免疽 ②放射免疫 效射免疸 ①免疫荧光 化 学发光 时间今料荧光免瘟 堵加反应灵敏度 标记免疫技术的理论检测灵敏度 放射免疫 10-10-10-12mo 」酶联免疫 10-9-10-10mo 化学发光 10-15mo 时间分辨荧光10-18mo 电化学发光 10-18 mno 、时间分辨荧光免疫分析( TRFTA (1ime-resolved fluorescence immunoassay 背景介绍 基本原理 技术特点 反应模式 背景介绍 979年,芬兰Wala公司研发部的 Soini和 Hemmi la首次提出了建立 稀土离子标记物的“时间分辨荧光免疫分析”理论 1983年, Soini和 Ko jola首先开发出以镧系元素为示踪物的时间分辨 荧光测量仪,建立了新的非放射性微量分析检测技术。同一年 Pettersson等人运用此仪器首次对人绒膜促性腺激素(hCG进行了时间 分辨荧光免疫分析 1984年, Hemmila确定了 DELFIA( Dissociation enhanced lanthanide Fluoroimmunoassay)这种时间分辨免疫分析技术方案,从而使 DELFIA成 为Wa11ac的专利技术 1988年,加拿大 CyberFluor公司的 Diamandis创立了一种不同于 DELFIA 的时间分辨荧光免疫分析,即 FAGen 2003年,时间分辨荧光分析技术获国家科技进步二等奖 基本原 价稀土离子包括有铕(Eu,钐(Sm),铽(Tb),销(D 等,它们的荧光光谱具有特异性强、 Stokes位移大,寿命长 的特点 DELFIA采用异硫氰酸苄基二亚乙基三胺四乙酸铕( DTTA-Eu 为双功能合试剂,其一端螯合Eu3+,另一端可与蛋白质的 NH2连接。在中性或接近中性pH条件下,DTA与Eu3+具 有足够的螫合稳定性,而在增强液(呈酸性)作 DTTA- Eu又能将鳌合的E山3+迅速、彻底地释放出来并与增强液中的 配体合、进入胶束的疏水内核,使E荧光得以成千万倍地 FIAgen采用的是以Eu+合物配基 BCPDA为标记物, 通过检测其与过量Eu形成的螫合物荧光进行定量。由于 BCPDA的可检测性不够理想, FIAgen需要利用生物素 亲合素信号放大来弥补 BCPDA检测灵敏度的不足 Eu+ Coo- CO0- Co0-C00 碱性 EU→DTA N=C=s HN-Protein Eu→DTTA nH-Prolein DELFIA标记技术 通过时间延迟,将特异性荧光与非特异性荧光 分辨开来,使理论本底达到0 340nm激发光 第二个循环 荧 光 613m长寿命荧光 短寿命荧光 400 800 1000 时间:(1s) 延迟时间测值时间 激发光 发射光 荧光强度 400 波长(nm)