水产品检测技术1 K值的测定 K值的测定.pptx

K值的测定; ; 鱼类的肌肉运动必须依靠三磷酸腺苷(ATP)转化提供能量， 而鱼体死后其体内所含ATP按下列途径分解: ATP→ADP(二磷酸腺苷) → AMP(一磷酸腺苷) → IMP(肌苷酸) → HxR(肌苷) → Hx(次黄嘌呤) K值是以核苷酸的分解产物作为指标的鲜度判定方法： ;K值与挥发性盐基氮的区别;K值的测量方法有高效液相色谱法(HPLC) 、极谱法、离子柱层析简 易测定法。 目前认为高效液相色谱法较好。 ;一、原理;二、试剂与仪器;2.标准品配制 （1）标准储备液:准确称取腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷各10mg(精确至0.01mg)，用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为1.00mg/mL；准确称取次黄嘌呤5mg(精确至0.01mg)，用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为0. 500 mg/mL。各标准储备液置于4C冰箱中冷藏保存，保存期不超过一周。 （2）混合标准工作溶液：取适量标准储备液，用流动相配置系列标准溶波，使腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核浓度为0.200μg/mL、0.500μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、15.0μg/mL、40.0μg/mL、100μg/mL；使次黄嘌呤浓度为0.100μg/mL、0.250μg/mL、0.500μg/mL、2.50μg/mL、7.50μg/mL、20.0μg/mL、50μg/mL。使用时现配现用。 ;3.流动相配制 流动相：0.02:mol/L磷酸二氢钾溶液+0.02mol/L磷酸氢二钾溶液=1+1(V/V),用磷酸调节pH至6.0。 其中： 0.02 mol/ L.磷酸二氢钾溶液:准确称取2.722 g磷酸二氢钾,用水溶解并加水定容至1000 mL。 0. 02 mol/L磷酸氢二钾溶液:准确称取4. 566g磷酸氢钾，用水溶解并加水定容至1 000 ml。 ;4.仪器 （1）高效液相色谱仪 配有紫外检测器。 （2）冷冻离心机:8000 r/min，4℃。 （3）涡旋振荡器。 （4）pH计:精度0.01。 （5）微孔滤膜：0. 22μm,水相。 （6）分析天平:感量0.01mg。 （7）天平:感量0.01g。 （8）均质机。 ;三 、分析步骤;续）2.提取 将已调节pH值后的溶液转移到经预冷的容量瓶中，用4℃水定容至50mL，在4℃下8000r/min离心10min。重复操作一次。取出离心管，注射器吸取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤至进样瓶中，4℃保存，待测。 ;3.色谱参考条件 a)色谱柱：C18柱,250mm×4. 6 mm(i.d. ).粒径5μm;或性能相当者； b)流速：1.0mL/min； c)柱温:35℃； d)检测波长：254nm; e)进样量：20μL。 4.色谱测定 取标准工作液和试样提取液等体积进样，按上述色谱条件测定、外标法定量，标准溶液和试样提取液中腺苷三磷酸关联化合物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。 ;四、结果表述; V——最终定容体积，单位为毫升(mL)； F i——腺苷三磷酸摩尔质量551g/mol、腺苷二磷酸摩尔质量426g/mol、腺苷酸摩尔质量365g/mol、肌苷酸摩尔质量392g/mol、次黄嘌呤核苷摩尔质量268g/mol、次黄嘌呤摩尔质量136g/mol； ; 2. K值按下式计算，单位为百分率 式中: MATP——样品中腺苷三磷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MADP——样品中腺苷二磷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MAMP——样品中腺苷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MIMP——样品中肌苷酸的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MHxR——样品中次黄嘌呤核苷的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； MHx——样品中次黄嘌呤的含量，单位为微摩尔每克(μmol/g)； ; 感谢指导 期待合作