核酸检测实验室建立和应用汇编.ppt

核酸检测实验室建立与应用 卫生部临检中心深圳市血液中心血 液病毒核酸检测联合实验室 叶贤林  核酸扩增检测实验室的建立 人员 场地 检测方法选择 实施方案 依据:卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 (卫医发[2002]10号)  核酸实验室人员要求 资质:经过临检中心PCR培训班培训并取 得上岗证;通过血站核酸实验室岗前培 训考试合格。 培训:①无”核酸”的概念形成,②防污 染的概念③良好工作习惯的培养,④报告 的正确发放 后备人员的培养 16/1/29  样本离心交接区 试剂准备区 核酸实验场 标本制备区 地扩增区及扩增产物分析区 报告发放区  方法选择:M与PCR TMA PCR 扩增原理模拟自然DNA转录成mRNA的过程 模拟自然 DNA复制的过程 靶目标 RNA DNA MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶 DNA聚合酶 反应体系两种酶,两条引物, NTP, NTP一种酶,一对引物,dNTP 循环导热 温度条件 恒温(41.5℃) (变性,退火,延伸) 扩增仪器 水浴箱或者加热块 热循环仪 扩增产物 RNA DNA 扩增速度每个精环可以生成101004制物,以2扩增2=3b就能将待 因扩  7MA的优点 缺点 自动化程度高 不能绝对定量 灵敏度高 扩增效率高:10 16/1/29  PCR的优点 缺 易于自动化 汇集拆分过程繁琐 灵敏度高 扩增效率高 拆分可减低非反应性比率 16/1/29  核酸试剂质控 试剂的确认 试剂运输过程的控制(温度\条件\时限) 灵敏度的要求 内标的要求 ■试剂涵盖的基因型 16/1/29 8  检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测流程 标本清点、离心 常规检测 合格标本 待查标本复检 标本交接、电脑锁定 合格标本[不合格标本 s人份汇集 核酸提 单人份拆分 扩增检测 反应性标本」不合格标木 [明性标本 合格标本发布结果」 16/1/29  检测流程(2):常规筛査合格单人份标本检测流程 标本清点、离心 常规检测 合格标本 符查标本复检 单人份桧测 性柯本 应性柯本 单项目 应性 阳性就可疑 鉴别实啦 2016/2y