细胞生物学研究思路.pptVIP

医学遗传学国家重点实验室 State Key Laboratory of Medical Genetics 细胞生物学研究思路的探讨 李家大 医学遗传学国家重点实验室 Email: lijiada @skim.edu.cl Hum Genet(2012)131:491-503 DOI10.100710982 Functional analysis of Waardenburg syndrome-associated PAX3 nd SoX10 mutations: report of a dominant-negative SOX10 mutation in Waardenburg syndrome type II Hua Zhang· Hongsheng Chen· Hunjin Luo· J ing an· Lin Sun· Lingyun Mei Chufeng he· Lu jiang· Wen jiang· Kun Xia·Jia-DaLi· Yong Feng 研究背景 · Waardenburg综合征( Waardenburg syndrome,ws)是最常见 的综合征型遗传性耳聋,主要遗传方式是单基因致病的常染色体 显性遗传伴不全外显。 ·主要临床特征:耳聋与着色异常(虹膜、皮肤、毛发) 分型 致病基因 临床表型特征 WSI PAX3 耳聋、着色异常、眼距增宽 wS2MTF、SOX10、SNAI2 耳聋、着色异常 WS3 PAX3 耳聋、着色异常、上肢发育异常 (Kein- Waardenburg综合征) wS4SOxX10、END3、 ENDBR 耳聋、着色异常、巨结肠 (Shah- Waardenburg综合征) 研究背景 神经嵴发育不全:由于神经嵴细胞( neural crest cells,NCC)发 育缺陷或障碍而导致神经嵴岀现异常的增殖、生存、迁徙和分化 由于NCC发育不良导致的这些组织和细胞的病变统称为神经嵴病。 NCC 胚貽背神经管迁徙 黑素细神经元细拘神经胶质细胞骨与软骨细泡 神经隋源性衍生物 色素细胞中枢神经系统周围神经与肠道神经系统肌肉骨骼系统 研究背景 AsP□ aMSH ADcY ATP一cA Fuzzed Pac Soxt CREB 阝 cater n M Tyros 研究背景 本研究 Waardenburg综合征病例基因型和表型特征 分型基因氨基败改变耳聋虹膜异色皮肤色素改变内眦异位巨结肠 wS2 MITF R217I先天性亮蓝色虹膜 面部大量雀斑 wS2MTFT192fs先天性完全性虹膜异色 WSI PAX3 HSOD 先天性完全性虹膜异色 WSI PAX3Hl86fs先天性亮蓝色虹膜 ws2SOX10E248fs先天性亮蓝色虹膜 wS2SOX10G37fs先天性亮蓝色虹膜 wS2SOX10G38fs先天性亮蓝色虹膜 WS2SOX10R43X先天性完全性虹膜异色面部少量雀斑 WS4SOX10W85X先天性完全性虹膜异色 研究背景 HSOD H186fs PAX3 NH2 COOH SoX10 NH 研究目的 前期研究基因组水平:WS致病基因突变检测表型一→基因型 后基因组水平:Ws致病基因功能检测 本文研究 分子水平:WS发病机制 临床水平:ws基因型如何导致表型基因型→表型 研究内容 活性检测 PAX3与SOX10 MITE ②蛋白表达水平 相互作用 PAX3 SOX n vitro 蛋白与DNA的结合 蛋白亚细胞定位 课程提纲 蛋白质加标签(Tag); 定点突变; 转染 亚细胞定位; Reporter assay DNA-蛋白质相互作用; 蛋白质相互作用; 蛋白质半衰期。