微生物发酵技术实训教案.pdfVIP

野生型菌株的筛选 经典的发酵产物来自微生物， 土壤是微生物的大本营。 生产菌株的选育源头都来自 于自然界。 如何从自然界中筛选目的微生物， 可以根据目的微生物和产物的特性作为筛选条 件，进行筛选提高筛选效率，从而有效的解决菌株从无到有的问题。 实训一 产淀粉酶菌株的筛选 一． 实 验 目 的 筛选一株能够合成分解淀粉的微生物。 二． 原 理 自然界微生物种类繁多， 有些微生物能够以淀粉作为碳源进行生长繁殖是因为它们能够 合成分泌淀粉酶， 因此我们能够从自然界中定向分离出合成淀粉酶的微生物。 当能合成淀粉 酶的微生物在固体培养基中生长时， 会将淀粉酶分泌到菌体周围， 将菌落周围的淀粉水解成 为小分量的糊精、聚糖和单糖。这些水解物不能包裹单质碘从而在菌体周围形成透明圈。 三 . 材料与仪器 . 材料 蛋白胨，牛肉膏， ，琼脂条，可溶性淀粉，碘液。 . 仪器 牛皮纸、培养皿、试管、涂布棒、恒温培养箱、玻璃珠 四．方法与步骤 . 筛选培养基的配置 可溶性淀粉 2g ， 5g ，牛肉膏 5g ，蛋白胨 10g ，琼脂 20g ，水 . 碘液的配置 称取 2.0g ，用去纯水溶解，迅速称量 0.5g 并加入溶液中，用纯水定容到，搅拌溶解 后保存在棕色瓶中，橡皮塞封口。 . 土样的采集 ⑴ 每大组取三种不同环境的土样并记录当时取样环境情况 （每一小组以其中一个地方进行 分离）。 ⑵ 以小组为单位进行稀释分离。 取土样 1 克，加入 无菌水，逐步稀释至、 、。（每个梯度涂个瓶皿） 。 ⑶ 30 ℃恒温培养小时 ⑷ 产淀粉酶菌株的鉴定。 挑选单菌落影印到无菌瓶皿上， 同时用签字笔对各单菌落在底皿标号。 标记接种过的培 养皿 30℃培养，取其中一皿喷洒稀碘液记录有水解圈的单菌落。与此对应找出合成淀粉酶 的菌株。 比透明圈＝透明圈直径（） 菌落直径（） [] 每小组调去活性优良的菌株接入斜面试管保存，待下一次用。 五．记录与结果 . 环境情况 地点一： 地点二： 地点三： . 绘制出透明圈 数据共享 地点一 地点二 地点三 产酶菌 落数 比透明 圈 六．结果分析 从不同地点获得的结果进行分析为什么会出现这样的差异你可以初步得出什么样的结论。 七 作业 . 为什么要用淀粉作为碳源？ . 在观察结果的过程中为什么要及时观察 , 否则会有什么的后果 . . 为什么同样一个同样要稀释几个不同梯度进行涂平板 . 菌种选育 微生物菌种的选育目的防止菌种退化解决生产实际问题， 提高生产能力， 提高产品质量， 开发新产品。 目前菌种选育的方法主要有自然选育、 诱变育种、 杂交育种、 分子育种等手段。 但是诱变育种还是育种的主流， 诱变育种根据诱变剂的种类可分为化学诱变和物理诱变。 本 实验以紫外线作为物理剂进行诱变。 诱变过程一般包括诱变出发菌株的选择、 诱变剂量的选 择和诱变及其筛选。 实训二 产淀粉酶菌株的诱变育种 一. 目的 在最佳诱变剂量下选育发生淀粉酶产量发生正突变的菌株。 二. 原理 发生正突变的概率约为左右， 需要在大量的照射菌落中寻找发生正突变的菌株。