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二○一二年十二月
普通PCR仪和荧光定量PCR仪的使用
Part I 中心PCR (polymerase chain reaction)仪
简介
Part II PCR 原理
Part III 普通PCR仪操作规程
Part Ⅳ 荧光定量PCR原理
Part Ⅴ 荧光定量PCR仪操作规程
Part I 中心PCR仪简介
荧光定量PCR仪
Rotor gene 3000
普通PCR仪
Gene AMP System 9700
Part II PCR原理
基因表达
转录水平
翻译水平
基因水平
(Real time) RT-PCR
Western blot
PCR
核酸的功能是储存
和转移遗传信息,
指导和控制蛋白质的合成;
而蛋白质的主要功能是
进行新陈代谢活动和
作为细胞结构的组成成分。
PCR概念
利用DNA聚合酶、一对引物和四种dNTP(三磷酸脱氧核苷酸),对模板DNA反复多次地进行复制,从而得到大量扩增产物的反应过程,称为PCR。
Part II PCR原理
Part II PCR原理
PCR反应五要素
引物(primer)
酶 (Taq DNA polymerase)
dNTP(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)
Mg2+ (magnesium)
模板 (template)
Part II PCR原理
PCR扩增的基本反应步骤
1、变性:加热至95ºC左右,使模板DNA变性。
2、退火:降低温度至适合的温度(55ºC左右,引物与模板 DNA的互补序列配对结合。
3、延伸:温度在70ºC左右时,Taq DNA聚合酶从引物3端催化复制链以5 -3方向延伸。
重复1-3步
25-30轮
目的DNA片段
扩增100万倍以上
DNA双螺旋
DNA单链
与引物复性
DNA变性
形成2条单链
子链延伸
DNA加倍
Part II PCR原理
Part II PCR原理
PCR原理
PCR的理论方程:Y=x×(1+ Ev)n
Y:扩增物数量;
X :起始模板数量;
Ev:扩增效率;
n:扩增循环数
Part III 普通PCR仪操作规程
开机操作:
打开PCR仪电源开关;
向后平推PCR仪顶盖,放入PCR薄壁管。
向前平推PCR仪顶盖,并均匀用力将反扣部分压下。
注意:
9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。
PCR仪软件操作指南:
Part III 普通PCR仪操作规程
Gene Amp PCR System 9700
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Part III 普通PCR仪操作规程
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Part III 普通PCR仪操作规程
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