目的基因的克隆PPT课件.pptVIP

第五章 目的基因的获得; 基因工程或DNA重组技术三大用途的前提条件是从生物体基因组中分离克隆目的基因，目的基因获得之后， 或确定其表达调控机制和生物学功能， 或建立高效表达系统，构建具有经济价值的基因工程菌（细胞） 或将目的基因在体外进行必要的结构功能修饰，然后输回细胞内改良生物体的遗传性状，包括人体基因治疗。 ; 一般来说，目的基因的克隆战略分为两大类： 一类是构建感兴趣的生物个体的基因文库，即将某生物体的全基因组分段克隆，然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆； 另一类是利用PCR扩增技术甚至化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆表达。;A PCR法;使用PCR技术克隆目的基因的前提条件是： 已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列， 根据该序列化学合成聚合反应所需的双引物 ;5‘; 由Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物中，其3’末端总是会带有一个非模板依赖型的突出碱基，而且这个碱基几乎总是A，因为Taq DNA聚合酶对dATP具有优先聚合活性。由于该突出碱基的存在，克隆时即可以采取TdT末端加同聚尾的方法与载体拼接，也可以使用专门的T载体克隆 ;3. PCR盒式引物扩增法;B 基因文库的构建;基因文库的基本概念;基因文库的基本概念;基因文库的基本概念;基因文