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蛋白质含量的测定
蛋白质浓度测定采用考马斯亮蓝染色法。这一方法基于考马斯亮蓝 G-250在
一定浓度的乙醇及酸性溶液中为棕红色， 当它与蛋自质结合后， 变为蓝色。 测定
方法非常简单，只要将蛋白质样品加到染料试剂中，通过测定 595nm处光吸收的
增加量可知其结合蛋白质的量。
考马斯亮蓝试剂的配制：
100mg考马斯亮蓝 G-250溶于 50mL 95%(V/V) 乙醇中，加入 100mL 85%(V/V)
磷酸，用蒸馏水定容至 1000mL，滤纸过滤。 最终试剂中含 0.01%(W/V) 考马斯亮
蓝 G-250，4.7%(V/V) 乙醇， 8.5%(V/V) 磷酸。
测定方法：
取1.0mL样品液，加 5.0mL上述考马斯亮蓝 G-250溶液，室温静置 2min ，在
595nm下测吸光度。根据 OD值，从牛血清蛋白含量标准曲线中得出蛋白含量。
表 4-1 蛋白质标准曲线的建立方法
Table 4 －1 Standard cure of protein
试管编
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
号
标准蛋
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
白溶液
1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
蒸馏水
考马斯
亮蓝 5ml
G-250
OD 595 0 0.130 0.199 0.260 0.310 0.367 0.432 0.436 0.492 0.542 0.542
0.7
0.6
0.5
0.4
5
9
5
D
O 0.3
0.2
0.1
0.0
0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10
Concentration of protein( mg/ml)
图 4-5 蛋白质标准曲线
Table 4-5 Standard cure of protein
其标准曲线回归方程为： y=0.0172+6.6164x ，R2=0.9976
y 为 595mn 的吸光度， x 为牛血清白蛋白的浓度
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