乳酸菌菌种的分离筛选方法.pdfVIP

乳酸菌菌种的分离筛选方法 乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。 为兼性厌 氧菌，杆状或球状， 革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高， 需要提供丰富的肽类 氨基酸 维生素。在琼脂表面或内层形成较小的 白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 植物乳杆 菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊 糖片球菌等。 乳杆菌常用 MRS琼脂作半选择培养基。 当乳杆菌仅是复杂区系中的部 分菌类 时，SL 培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用 GYP培 养基，链球菌有 TYC培养基、 MS培养基。 M17培养基被用作乳球菌的 分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运 动，无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。 乳酸片球菌细胞呈球状， 直径 ~ μm，在直角两个平面交替形成四联状， 一般细胞成对生， 单生者罕见， 不成链状排列。 革兰氏阳性， 不运动， 兼性厌氧。在 MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物 呈丝状。 乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落， 不易观察， 所以分离时先 富集培养并选择合适的培养基。 分离培养基一般添加西红柿、 酵母膏、 吐温-80 等物质，也常常加入醋酸盐， 因醋酸盐能抑制部分细菌生长， 对乳酸菌无害。 培养基中添加碳酸钙， 乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈， 作为 分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。 乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸， 维生素及微氧，一般菌落比较小。 分离培养基一般可添加西红柿 酵母膏 油酸 吐温等物质，均具有促 进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长， 对乳酸菌无害。 一 . 筛选方法： 1. 溶钙圈法： 利用一些产酸类细菌在含 CaCO3的培养基上产生 CaCO3溶解圈，从而 筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入 CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌； ②中和 产生的酸，以维持培养基的 PH。 筛选过程：样品预处理→梯度稀释至 10-6 →选择合适的稀释度涂布 →37℃培养 48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在 MRS培养基上划线→ 挑起单菌落染色， 经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管 穿刺 4℃冰箱保存。 2. 溴甲酚绿指示剂法： 培养基： MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 筛选过程： 同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落， 挑取使溴甲酚绿 变色的菌落。 二 . 菌种的分离筛选 1. 培养基： ★麦芽汁碳酸钙培养基： 麦芽汁 （10BX）1L 预先灭菌碳酸钙 5-10g/L PH 自然 （分离 用） ★★牛肉膏 10g/L 蛋白胨 10g/L 酵母膏 10g/L 番茄汁 200g/L 葡 萄糖 10g/L 吐温% CaCO315-20g/L 溴甲酚绿 % （分离用） ★番茄汁碳酸钙培养基： 酵母膏 g/L 葡萄糖 10 g/L 番茄汁 100mL 蛋白胨 L KH2PO4 2.0 g/L 吐温 mL PH