实验室常用6种耐热DNA聚合酶总结.docVIP

耐热dna聚合酶多应用在PCR技术中。各种耐热DNA聚合酶均具有5-3聚合酶活性，但不一定具有3-5和5-3的外切酶活性。3-5外切酶活性可以消除错配，切平末端;5-3外切酶活性可以消除合成障碍。由于上述这些不同，可以将耐热DNA聚合酶分为三类： 一、普通耐热DNA聚合酶 taq DNA 聚合酶 由一种水生栖热菌yT1株分离提取出，是发现的耐热DNA聚合酶中活性最高的一种，达200,000单位/mg。具有5-3外切酶活性，但不具有3-5外切酶活性，因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。 TaqDNA聚合酶还要具有非模板依赖性活性，可将PCR双链产物的每一条链3加入单核苷酸尾，故可使PCR产物具有3突出的单A核苷酸尾;另一方面，在仅有dTTP存在时，它可将平端的质粒的3端加入单T核苷酸尾，产生3端突出的单T核苷酸尾。应用这一特性，可实现PCR产物的T-A克隆法。 Tth DNA 聚合酶 从Thermus thermophilus HB8中提取而得，该酶在高温和MnCl2条件下，能有效地逆转录RNA;当加入Mg2+后，该酶的聚合活性大大增加，从而使cDNA合成与扩增可用一种酶催化。 二、高保真DNA聚合酶 pfu DNA 聚合酶 是从Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高温DNA聚合酶，它不具有5-3外切酶活性，但具有3-5外切酶活性，可校正PCR扩增过程中产生的错误，使产物的碱基错配率极低。PCR产物为平端，无3端突出的单A核苷酸。 Vent DNA 聚合酶 该酶是从Litoralis栖热球菌中分离出的，不具有5-3外切酶活性，但具有3-5外切酶活性，可以去除错配的碱基，具有校对功能。 三、DNA序列测定中应用的耐热DNA聚合酶 Bca Best DNA 聚合酶 从Bacillus Caldotenax YT-G菌株中提纯，并使其5-3外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸长性能优越;可抑制DNA二级结构形成，可以得到均一的DNA测序带。 Sac DNA 聚合酶 从酸热浴流化裂片菌中分离，无3-5外切酶活性，可用于DNA测序，但测序反应中ddNTP/dNTP的比率要高。