液相色谱分析仪法.pptxVIP

高效液相色谱分析法一、高效液相色谱仪HPLC二、高效液相色谱法的特点feature of HPLC三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC四。固定相和流动相high performance liquid chromatograph主讲:王庆俐feature and instrument of HPLC一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 目前常见的HPLC仪生产厂家国外有Waters公司、Agilent公司（原HP公司）、岛津公司等，国内有大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。液相色谱仪（1） high performance liquid chromatograph液相色谱仪（2）液相色谱仪（3）液相色谱仪（4）二.概论： ㈠定义：以液体为流动相的色谱法称为液相色法。用常压输送流动相的方法为经典液相色谱法，这种色谱法的柱效能低、分离周长。高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点： 1.应用了颗粒极细（一般为10μm以下）规则均匀的固定相，柱效高，分离效率高；2.采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；3. 广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。目前，已发展了多种固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。㈡.色谱法分类 按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC): 适用于分离挥发性化合物。有机物质中分子量小于400的采用气相色谱法分析，此范围的物质约占有机物质总数15%~20%.液相色谱法(LC): 适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。分子量为400~2000的有机物质可采用液相色谱法分析，而分子量大于2000的则须用凝胶色谱法。按固定相性质及外形分类柱色谱: 固定相装在柱管内的色谱分析法纸色谱: 固定相为滤纸的色谱分析法薄层色谱: 固定相压成或涂成薄膜的色谱分析法（三）HPLC的主要分离类型和原理： 高效液相色谱法按分离机理的不同主要分为四类：1. 液-固吸附色谱（liquid-solid adsorption chromatography）固定相：固体吸附剂。如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：主要是非极性的烃类（如己烷、庚烷）并加入少量极性溶剂作缓和剂（如水、甲醇）。基本原理：组分在固定相吸附剂表面对不同物质吸附能力不同使混合物分离的；吸附力越强,保留时间越长,反之,保留时间短,。适用于分离分子质量中等 （200~1000 ）的油溶性试样或极性较小的植物色素等组分，大多数用于非离子型化合物，。常用于分离同分异构体不适宜于分离强极性的离子型化和物和同系物。 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾（离子型化合物易产生拖尾）；2. 液-液分配色谱（liquid- liquid partition chromatography） 固定相与流动相均为液体，流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式： K=式中，Cs—溶质在固定相中浓度；Cm--溶质在流动相中的浓度； 分离的顺序取决于K值，在同一色谱条件下，样品中K值大的组分保留值大；后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离，因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。在HPLC中，固定相确定后，K主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值，以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的。 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。固定相：将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的 液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC); 流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反。正相色谱法：由极性固定相(如氨基与腈基键合相)和非极性（或弱极性）流动相 (烷烃类如正已烷、环已烷）所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱、氨基柱等，代表性的流动相是正己烷。用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚