qijAAA病毒学第四章-病毒的侵染与复制PPT课件.ppt

第四章 病毒的侵染与复制;本章重点;;第一节 病毒复制研究的实验系统; 二、噬菌体(phage)的繁殖;烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段： 吸附、侵入、复制、装配和释放。;①吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异性吸附部位进行特异性结合，噬菌体以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突“钉”在细胞表面上。 ②侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白质外壳留在细胞外。 ③复制 ：包括核酸的复制和蛋白质合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，会控制宿主细胞的合成系统，然后以噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需的核酸和蛋白质。;④装配： 主要步骤有： DNA分子的缩合——通过衣壳包裹DNA而形成头部——尾丝及尾部的其它部件独立装配完成——头部与尾部相结合——最后装上尾丝，至此，一个个成熟的形状、大小相同的噬菌体装配完成。;⑤释放： 方式： 裂解：包括T4噬菌体在内的大多数噬菌体以裂解细胞的方式释放。 分泌：噬菌体穿出细胞，细胞并不裂解。（丝状噬菌体） 通常情况下，一个噬菌体通过上述五个过程能合成100——300个噬菌体。烈性噬菌体的这种生长繁殖方式也称为一步生长，;; 2、一步生长曲线 一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线。 （1）实验设计依据： 通常噬菌体和细菌的混合比例为1:10，保证1个菌体只被1个噬菌体感染,避免二次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。 ;（2）实验过程: 敏感菌10ml Phage 1ml 混匀，5min,使之吸附 离心或用抗phage血清处理, 去除过量phage 高倍稀释,吸附phage的菌悬液(避免多次吸附) 37℃培养,定时取样 ;噬菌斑: 概念：将少量噬菌体与大量敏感菌混合培养在营养琼脂中，在平板表面布满宿主细胞的菌苔上,可以用肉眼看到一个个透明的不长菌的小圆斑，称为噬菌斑。(每个噬菌斑一般是由一个噬菌体粒子形成的。) 应用: 噬菌斑可用于检出、分离、纯化噬菌体和进行噬菌体的计数。;; 取样人为裂解处理（每5min） 样品中加入氯仿裂解细胞 ; 取样（每5min） 离心除去细菌 上清加入敏感菌液中 适当稀释混合液 涂布 计数噬菌斑 ; 以培养时间为横坐标,以噬菌斑数为纵坐标,绘制成的曲线为一步生长曲线。 可分以下阶段： 潜伏期 (latent phase) 裂解期 (burst phase) 稳定期 (plateau phase) ; 一步生长曲线;潜伏期：从噬菌体吸附细菌到细菌细胞释放新的噬菌体之前的这段时期。曲线平行于横轴，噬菌体数无变化。样品中无游离的噬菌体。(潜伏期前的噬菌斑数是噬菌体数,也就是感染噬菌体的细菌数). 病毒在感染细胞内消失到细胞内重新出现新的感染病毒的时期为隐蔽期(eclipse period)。 裂解期：曲线直线上升，子代噬菌体不断释放到培养基中,直到达到一个极限。 稳定期:感染细胞后复制的子代噬菌体全部释放，噬菌斑数稳定，一次感染结束。;裂解量:每一受感染细胞所释放的新的噬菌体的平均数。 稳定期噬菌斑数 裂解量 = 潜伏期噬菌斑数 不同的噬菌体或同种噬菌体感染敏感菌后所释放的噬菌体数不同，与噬菌体种类、宿主细胞菌龄以及环境因数有关。 T4约为100，ΦX174约为1000，f2高达10000、T2仅为200。 ; MOI :multiplicity of infection，感染复数。 传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研