荧光分析在生命科学领域中应用研究进展.pptVIP

荧光分析 在生命科学领域中 的应用研究进展  荧光分析技术在生命科学领域方面的应 用非常重要,已经做了的研究也非常多,如 Whitten,DG等人合成了一系列荧光化合物, 可用来作为检测生物识别反应的生物传感器 如核酸杂交反应、酶诱导聚合肽反应等,也 可用来检测目标分析物如酶、核酸等[1 本文对2004年度国内外的一些研究动态进 行了总结,主要有核酸、蛋白质、细胞及药 物分子等方面。  1磁酸方面的应用死究进 DNA(DNA)序列进行了基因表达。三种方法 都从整个RNA(RNA样品开始,其中两种用 到了第一个DNA互补链的合成,通过直接的 荧光核苷酸标记的加入或者间接的荧光染料 偶合来对其进行标记;另外一种方法是把在 生命体内RNA的复制扩大至第一个和第二个 互补DNA链的合成。前两种方法主要应用于 聚合酶链反应产物或长的寡核苷酸的分析 后一种方法主要应用于合成的寡核苷酸序列 实验的研究[2]。  要识别单摩尔序列的DNA需要有两种 特殊的酶一种是聚合物酶,用来复制 DNase(NA),目标是互补DNA的荧光标 记,一种是外核酸酶,用来使完整的染料 标记DNA成功地分解。最近, Brakmann,s等人发现 Escherichia coli DNA聚合酶I的 Klenow部分非常适合 DNA的合成,包括了自然界全部嘧啶核苷 酸(dCTP和dTTP)的特殊罗丹明标记类似物 [3]  Wang,L等人测定了荧光素和四甲基罗丹明(TMR)标 记的寡核苷酸及其杂交到一般的DNA模板上时的吸收发射光 谱图、荧光量子产率、荧光共振能量转移和熔点等,以此来 辨别TMR标记的寡核苷酸和其杂交到一般的DNA模板上时 的不同,同TMR标记的寡核苷酸相比,TMR标记的双链即 杂交到一般DNA模板上时的吸收和发射峰均发生位移,这与 TMR在寡核苷酸上的位置有关。测量荧光量子产率和熔点可 看出TMR在双链内同核苷酸的反应是有顺序的 (T1T5T11,T16)。作者提出了一种双态模式来描述双链 中TMR的构型,做了四种FRET化合物,对它们熔点的测定 说明了其与TMR标记的双链有相同的形式,推断TMR和鸟 嘌呤核苷酸间的相互作用在FRET化合物中维持了下来,这 种作用使供体分子和受体分子结合到一起,则促使了两种染 料分子间的作用,这种作用可在FRET化合物的吸收测量中 看到[4]。  Solomun,T等人通过荧光方法研究了DNA寡核苷 酸的分解,其中发射电子能低于电子激发能级,单链 寡核苷酸固定于金表面,电子放射后,杂交到互补的 荧光标记了的G3A3C6链上,对阴阳两极的荧光信号的 分析结果说明了DNA寡核苷酸的分解[5]。 Willen,S等人通过测定与产物量成正比的荧光 信号来监测由定量PcR(qPcR)而产生的cDNA的扩增 qPcR扩增图描述的是一种指数相、非指数相最后以 平滑结尾的图。既然探针的分解量反映了扩增子的合 成,则反过来可用荧光强度来测定指数相中产物扩增 子的浓度,然后用荧光数据可估计qPcR中的初始 cDNA浓度,而并不需要涉及任何已知cDNA目标浓 度的计算[6]  Gruber,NM等人利用低温荧光研制出了一种新型的 生物传感芯片,可用来同时检测DNA致癌物化合物,利 用单克隆抗体(MAb)-Au生物传感芯片对DNA-致癌物 化合物进行了分析检测。用二硫基双-(琥珀酰亚胺基丙 酸盐)DSP作为蛋白质交联剂,用重组蛋白质A为MAbs 提供固定化方向,从而对检测限、动力学范围和MAb Au生物传感芯片的生物感应能力进行了优化【7。 Mishima, Shuzo利用荧光技术研制了DNA芯片读取 器,其中包括有七部分:()包含有DNA芯片的溶液的驱 动单元;(激发光束的发射单元;白使激发光束聚焦的 物镜;c荧光镜:把激发光束引导至物镜并从DNA芯片 中发射出荧光;荧光镜中发射出来的荧光成像镜; 个CCD照相机;(DNA芯片解离度的光学检测系统 此装置以DNA芯片反射的激发光为依据,通过控制溶液 驱动单元来阻止DNA芯片的解离[8]。  Yoshimoto,K等人把包含有寡脱氧核苷酸的脱 碱基位点同2-氨基-4氧化蝶啶结合在一起,能对鸟 嘌呤碱基进行选择性识别,相对于其它的核苷酸碱 基对来说它引起了荧光猝灭,这使之可用肉眼就能 对鸟嘌呤-腺嘌呤的转化进行测定[9]。 Zhang,LeiZ.和 Cheng,Peng用甲基蓝(MB) 作为荧光探针对N(Ⅱ)离子与DNA间的相互作用进 行了研究。MB通过插入模式同双螺旋DNA键合在 起,当N(Ⅱ离子加入到 MB-DNA体系中时