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荧光显微镜的基本使用方法 实验目的 1.了解荧光显微镜的基本原理 2.掌握荧光显微镜的基本结构和 使用注意事项; 自发性荧光物质 神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光 肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈 绿色荧光。 某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质 儿茶酚胺、5一羟色胺、组胺等)在甲醛作用 呈不同颜色的荧光。 组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的 荧光 嗜中性粒细胞中脱氢酶辅酶呈现一定的荧光 DAPI 372 456 AMCA 350 450 Hoechst 33258 365 465 FITC 490 520 Acridine o range 490 590 Acridine Yellow 470 550 CY3 552 565 TRITC 541 572 Propidium lodide 530 615 Wavenumbers(cm)2500 Wavelength (nm) 荧光显微镜的优点和用途 检出能力高 对细胞的刺激小 能进行多重染色 用途: 物体构造的观察 n荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析 实验原理 发射滤色镜 激发滤色镜 (阻挡滤片) unwanted fluorescent signals 光源 assing the specific green fluore scein emission between LIGHT OURCE 分色镜 1 light below 510 nm but transmits light above 510 nn lirst barrier filter: lets through only blue light with a wavelength between 450 and 490 n objective lens 实验原理 欲滤镜 荧光显微镜的光路及主要部件 分色镜 光源 激发光挡片 激发滤色镜 发光片 分色镜 发射滤色镜 物镜 国1.光显礅铳光路模式图 ight illuminator/ BX-RFAA Maintains ste WO and U-FWT units.Also, equipped zed shutte phase contrast. A host personal outer and Bx-CB are required UFCRR 6 32 zan e0r sy for emision and u- 97232) for transmitted light Motorized revolving nosepi Motorized sextuple revolving pece with slider slot lo Stage adjustment buttons Motored universal conde e compou an e aceg lens swing aut and aperture iris diaphragm. Film plane lectrical Contacts tted capable of producing flt ected Llg ter is rarely used today. Epi-illuminat Equipped amination diaphragm, filters, etc )are built into the main frame, wl 2 that cor or and Breath on filter, As illustrated above, light collector lens and then the field and aperture by d叫一 mirror before passing through a barrier filter and into the microscope eyepieces or camera 激发光源 高压汞灯拥有313,337,365,405,436,546,and 577纳米的峰值谱。高压 Xenon灯有连续的可见光光 谱范围,光源强度比较平均。 365436 汞灯光谱 avenumbers (cm)2500 Wavelength (nm)