微生物发酵技术 任务三 影响种子质量的因素及控制 影响种子质量的因素及控制.pptVIP

项目四 种子扩大培养技术 单元二 微生物发酵制药技术基础 任务三 影响种子质量的因素及控制 * （一）影响孢子质量的因素及控制 培养基 培养条件 培养时间和冷藏时间 * 1.培养基 生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象，其主要原因是原材料质量波动。 例如在四环素、土霉素生产中，配制产孢子斜面培养基用的麸皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量的不同对孢子质量的影响也不同。 蛋白胨加工原料不同如鱼胨或骨胨对孢子影响也不同。起主要作用的是其中无机离子含量不同，如微量元素Mg2+ 、Cu2+ 、Ba2+能刺激孢子的形成。磷含量太多或太少也会影响孢子的质量。 * 水质的影响：地区不同、季节变化和水源污染，均可造成水质波动，影响种子质量。 菌种在固体培养基上可呈现多种不同代谢类型的菌落，氮源品种越多，出现的菌落类型也越多，不利于生产的稳定。 * 2.培养条件（温度和湿度） 温度和湿度对多数品种斜面孢子质量有显著的影响。例如：龟裂链霉菌斜面 温度：36.5-37℃ 湿度：40-50% 相对湿度（%） 斜面外观 活孢子计数（亿/支） 16.5~19 25~36 40~45 上部稀薄、下部稠略黄 上部薄、中部均匀发白 一片白，孢子丰富，稍皱 1.2 2.3 5.7 * 3.培养时间和冷藏时间 培养时间 孢子培养的时间应该控制在孢子量多、孢子成熟的阶段终止培养。 冷藏时间 冷藏时间对孢子的生产能力也有影响。例如在链霉素生产中，斜面孢子在6? C冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一个月降低18%，冷藏3个月后降低35%。 * 4.接种量 接种量大小影响到培养基中孢子的数量，进而影响菌体的生理状况。 * （二）影响种子质量的因素及控制 培养基 培养条件 种龄 接种量 * 1.培养基 营养成分适合种子培养的需要 选择有利于孢子发芽和菌体生长的培养基； 营养上要易于被菌体直接吸收和利用； 营养成分要适当丰富和完全，氮源和维生素含量要高 营养成分要尽可能与发酵培养基相近。 温度过低，菌种生长发育缓慢 温度过高会使菌丝过早自溶 在制备土霉素生产种子过程中，高于37℃培养时，孢子接入发酵罐后表现出糖代谢变慢，氨基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。　　 2.培养条件 （1）温度 （2）通气与搅拌 足够的通气量，以保证菌种代谢正常，提高种子的质量 搅拌可提高通气效果，促进生长繁殖，过度搅拌导致培养液大量涌泡，液膜表面的酶易氧化变性，泡沫过多增加染菌机会，增加能耗 丝状微生物不宜剧烈搅拌 3.种龄 种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。　 过老：生产能力下降，菌体自溶。 过嫩：发酵前期生长缓慢，发酵周期延长 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 4.接种量 接种量指移入的种子的体积和接种后培养液的体积比。接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中的繁殖速度。 较大的接种量——可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。 接种量过大——会引起溶氧不足，影响产物合成； 接种量过小——会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。 发酵生产的趋势：采取大接种量及丰富培养基。 增大接种量方法： 1、双种法：两只种子罐，一只发酵罐 如卡那霉素：双种比单种的发酵单位提高8%，到达产量高峰的时间提前。 2、倒种法：将培养适宜的发酵液倒出适量给另一个发酵罐作为种子。 　 如链霉素：倒种法比单种法的发酵单位提高12%。 * 生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象，其主要原因是原材料质量波动。例如在四环素、土霉素生产中，配制产孢子斜面培养基用的麸皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量的不同对孢子质量的影响也不同。制备霉菌用的大（小）米，其产地、颗粒大小、均匀程度不同，孢子质量也不同。蛋白胨加工原料不同如鱼胨或骨胨对孢子影响也不同。此外，琼脂的牌号不同，据分析其中所含无机离子的差别而引起孢子质量的变化。 * 生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象，其主要原因是原材料质量波动。例如在四环素、土霉素生产中，配制产孢子斜面培养基用的麸皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量的不同对孢子质量的影响也不同。制备霉菌用的大（小）米，其产地、颗粒大小、均匀程度不同，孢子质量也不同。蛋白胨加工原料不同如鱼胨或骨胨对孢子影响也不同。此外，琼脂的牌号不同，据分析其中所含无机离子的差别而引起孢子质量的变化。