抗生素对聚磷菌的影响及中药对聚磷菌细胞物质的逆转.pdfVIP

摘要 近年来，抗生素作为新兴污染物，对水环境污染的严重危险性逐渐引起人们 的密切关注。其中能够在水中稳定存在的庆大霉素能够干扰蛋白质合成进而导致 菌体胞内蛋白质和DNA 的渗漏，进而严重阻碍污水生物处理过程中微生物正常 功能的发挥。而且污水生物除磷过程中抗生素的积累性和长期性诱导聚磷菌产生 抗性基因，并伴随以剩余污泥排放等途径对环境和人体造成无法估量的伤害。因 此，如何消除或者逆转庆大霉素胁迫聚磷菌胞内产生的抗性基因具有重要的意 义。传统方法消除菌体胞内抗性基因容易破坏菌体结构且成本高、效果不显著， 但已有研究发现中药消除或逆转微生物胞内抗性基因是一种低毒高效的途径。但 针对庆大霉素对聚磷菌的影响及中药对聚磷菌细胞物质逆转的相关研究较少。该 论文采用厌/好氧交替的平板迭代培养，综合5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐溶液 （BCIP）蓝白斑染色挑选结果和除磷率测试结果筛选聚磷菌，加入庆大霉素， 综合胞内蛋白质，DNA 泄露情况和菌液电导率变化情况及除磷性能测试分析聚 磷菌细胞膜和功能完整性，并采取拉曼光谱扫描蛋白质分析中药在逆转前后对蛋 白质结构的影响，最后采用荧光定量PCR 技术检测胞内庆大霉素抗性基因的丰 度在中药作用前后的变化。主要试验结论如下： （1）利用SBR 反应器采用厌氧/好氧交替对聚磷菌进行富集，采用BCIP 蓝 白斑筛选法、聚-β-羟丁酸 （PHB）和异染颗粒染色法及基因测序法对所筛选的 1 Exiguobacteriumsp.ZWU0009 聚磷菌进行鉴定，鉴定结果表明： 号菌种为 （微 小杆菌），2 号菌种为Bacillussp （芽孢杆菌），4 号菌种为Exiguobacterium acetylicumstrainSI17 （乙酰杆菌），5 号菌种为Exiguobacterium acetylicumstrain B 1 4 （乙酰杆菌），并选定 号微小杆菌和 号乙酰杆菌作为后续试验菌株。 （2）以所筛选的微小杆菌和乙酰杆菌为菌种，庆大霉素作用并获取抗性基 因后，采用3种中药即黄芩，五倍子，艾叶对微小杆菌和乙酰杆菌进行作用，对 3种中药作用前后聚磷菌的蛋白质、DNA 的泄露量、菌液电导率、除磷菌进行 测定，检测结果表明：黄芩、五倍子、艾叶作用耐庆大霉素的乙酰杆菌和微小杆 菌后，乙酰杆菌和微小杆菌蛋白质泄漏量、DNA 泄漏量、菌液电导率及除磷率 相较于正常菌种 （未受庆大霉素作用的聚磷菌，简称正常菌种）的细胞膜指标差 距较小，说明中药对微小杆菌和乙酰杆菌的逆转效果较好。 （3）以所筛选的乙酰杆菌和微小杆菌两种聚磷菌为菌种，经过黄芩，五倍 子，艾叶三种中药提取物分别对耐庆大霉素乙酰杆菌和耐庆大霉素微小杆菌进行 作用后，采用蛋白质提取试剂盒对菌种胞内总蛋白质进行提取，并对提取后的蛋 I 白质采用拉曼光谱仪进行扫描分析。研究结果表明：耐药乙酰杆菌和微小杆菌胞 -1 -1 -1 -1 -1 内蛋白质拉曼光谱波峰普遍在860cm 、918cm 、942 cm 、1000cm 、1025cm 、 1002cm-1左右，所对应的键位键能高，键长短，稳定性强，黄芩，五倍子，艾叶 三种中药作用后将耐药菌种蛋白质转化和正常乙酰杆菌和微小杆菌相同波峰位 置的蛋白质。 4 （）利用黄芩，五倍子，艾叶三种中药对耐药乙酰杆菌和耐药微小杆菌进 行作用，采用荧光定量PCR 扩增法分别对菌种胞内庆大霉素抗性基因丰度进行 测定。检测结果表明，耐药乙酰杆菌和耐药微小杆菌的庆大霉素抗性基因丰度均 大于空白组菌种的抗性基因丰度。经过黄芩，五倍子，艾叶三种中药逆转后，耐 药微小杆菌和乙酰杆菌的庆大霉素基因丰度均明显降低，并恢复至正常菌种水 平。 黄芩，艾叶，五倍子有效的逆转了聚磷菌胞内的庆大霉素抗性基因，为抗性 基因在环境的去除提供了新思路，具有一定的现实意义和基础理论引导价值。 图 [26] 表 [16] 参 [104] 关键词：聚