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组织染色方法汇总 青海大学 08级动植物检验检疫 王志强 常识： 1、酒精配制：例如将80%的酒精配制成70%的酒精时，可先将70ml 80%的酒精加入试管，再加蒸馏水10ml至80ml即可。 2、用酒精计测酒精浓度：不确定具体浓度时先用量程较大的测量。 3、一个染色缸容积约为50ml 4、组织脱水过程中可在70%酒精中长期保存。 5、玻片染色时，1:1表示二甲苯与无水酒精各半的混合物，DW表示蒸馏水。 6、嗜银染色染液配制： 银液：1 1%硝酸银水溶液3ml 2PH5.6，0.1mol/l醋酸盐缓冲液10ml 3双蒸水87ml 还原液：对苯二酚1g ，无水亚硫酸钠2.5g ，双蒸水100ml 7、0.1mol/l醋酸盐缓冲溶液配制方法： 1预先配制： A液：0.2mol/l醋酸溶液（11.5ml冰醋酸用蒸馏水稀释至1000ml） B液：0.2mol/l醋酸钠溶液（CH3COONa16.4g或CH3COONa.3H2O 27.2g用蒸馏水稀释至1000ml） 2 配制：取A、B液混匀并用蒸馏水稀释至1000ml即可。 PH范围 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 5.2 5.4 5.6 A液 463 440 410 368 305 255 200 148 105 88 48 B液 37 60 90 132 195 245 300 352 395 412 452 二、染色流程： 1、固定组织：常用甲醛溶液作为固定液。 4%多聚甲醛配制方法：1 A液配制：磷酸二氢钠溶液 31.2gNaH2PO4·2H2O溶于蒸馏水并稀释至1000ml 2 B液配制：磷酸氢二钠溶液 71.6gNa2HPO4·12H2O溶于蒸馏水并稀释至1000ml 3 PB液配制：A液95ml+B液405ml+500ml蒸馏水=1000ml 配置好后测定PH值用NaOH调整至7.4 4 4%多聚甲醛溶液 40g多聚甲醛+PB溶液定容至1000ml 2、切块修整：用解剖刀片将组织切成小块。 3、组织脱水透明及浸蜡： 溶蜡后使其冷却到表面出现薄膜为限，然后将其置于温箱中（蜡的熔点约550C左右，但为使操作过程中不使蜡凝固过快可将温箱温度设置为700C左右，但温度不能过高，过高可能伤及组织） 脱水 透明 浸蜡 50%AI(酒精) 50%AⅡ 70%AI 70%AⅡ 80%AI 80 %AⅡ 95%AI 95%AⅡ 100%AI 100%AⅡ 1:1 XI（二甲苯） XⅡ（二甲苯） 蜡一 蜡二 蜡三 2h 过夜 2h 2h 3h 过夜 1.5h 1.5h 0.5h 0.5h 1.5h 10分钟 0.5h 0.5h 45分钟 45分钟 4、包埋： 用蜡三进行包埋，包埋前将包埋框用二甲苯将框内擦干净，在包埋框上做好标记数字。组织块必须放于格子中央，且切面与格子地面平行。冷却后放入冰箱中冷冻5分钟左右便于取出蜡块。 5、切片、展片、贴片 6、片子脱蜡： XⅡ（二甲苯） XI（二甲苯） 1:1 100%AⅡ 100%AI 95%AⅡ 95%AI 80 %AⅡ 80%AI 70%AⅡ 70%AI 50AⅡ(酒精) 50%AI 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 7、蒸馏水槽中洗（注：本实验为双蒸水洗）3次 8、切片放入预热至600C的银液内3-5小时 9、取出切片，用滤纸抹去多余银液（或蒸馏水急洗一次） 10、入450C还原液内1小时（一分钟或更长，根据情况而定，镜检） 11、入5%Na2S2O3 1分钟（镜检）（注：本实验中为2%Na2S2O3.5H2O 30秒） 12、放入蒸馏水槽中晃动，冲去Na2S2O3 13、脱水、透明： 50%AI 50%AⅡ(酒精) 70%AI 70%AⅡ 80%AI 80 %AⅡ 95%AI 95%AⅡ 100%AI 100%AⅡ 1:1 XI（二甲苯） XⅡ（二甲苯） 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 5／ 14、封片： 树胶1-3滴左右。右手拿住镊子，左手大拇指与食指卡住片子另一端，从右往左推。防止产生气泡。