培养基制备的基本方法和注意事项.pdfVIP

. 培养基制备的基本方法和注意事项 1. 培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严 格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使 用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最 终 pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备 查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3. 培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配 方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置 于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4. 培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。 使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅， 以防有微量铜 或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或 大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。 在锅中溶化时、 可先用温水 加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。 待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培 养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混 合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5. 培养塞 pH 的初步调整 培养基各成分完全溶解后， 应进行 pH 的初步调正， 因培养基在加热消毒过程中、 pH 会 有所变化，例如，牛肉浸液约可降低 pH0.2. 而肠浸液 pH 却会有显著的升高。因此，对 这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终 pH ，保证培养基的 质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。 . . 6 ．培养基的过滤澄清 液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其 它澄清方法以达到此项要求。 一般液体培养基可用滤纸过滤法， 滤纸应拆叠成折扇成漏 斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。 琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。 亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过 滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。 如过滤法不能达到澄清要求、 则须用蛋清澄清法。 即将冷却至 55- 60℃ 的培养基放入大 的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的 1/ 2 ，每 1000ml 培养基加入 1-2 个鸡蛋 的蛋白． 强力振摇 3-5 分钟， 置高压蒸汽灭菌器中、 121℃加热 20 分钟、 取出趁热以绒 布过滤即可。 若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中 1-2 日、吸取其上清液即可。 7. 培养基的分装 培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得 超过容器装盛量的 2/ 3 。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎 （现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装 琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成 2 / 3 底层和 1/ 3