总酚含量测定.docVIP

7总酚含量测定 参考韩富根的方法，略有改动， 7.1样品处理：取鲜叶0.5g，加3ml 95%乙醇研磨成匀浆状， 再加5ml 95%乙醇过滤，用95%乙醇定容至25ml。以儿茶酚作标准曲线。 7.2样品测定：取2 ml待测液于10ml离心管中，再加入2 ml福林试剂，摇匀，3min后加入10%碳酸钠2 ml振荡。静置1 h后700 nm处比色测定，以2ml蒸馏水代替待测液作为空白。根据标准曲线计算总酚含量。【七种与小麦近缘的野生植物对禾谷缢管蚜抗性的生化机制】 7.3试剂配制 ①福林试剂：将钨酸钠25g、磷钼酸5g，磷酸12．5ml同蒸馏水188ml一道回流煮沸2h，冷却后用蒸馏水定容至1L。 ②10%碳酸钠溶液：用无水碳酸钠配制，冬季气温低时会析出碳酸钠结晶，可在温水浴上加热溶解后使用。 ③酚标准溶液：先配制成100ml含儿茶酚60mg的溶液，再依次配制成100ml中含儿茶酚不同浓度0.5 1.0 1.5 2.0mg (临用时再配)。10mg/100ml为母液 标准系列的配置 总体积ml 6 6 6 6 6 6 福林试剂ml 2 2 2 2 2 2 10%Na2CO3ml 2 2 2 2 2 2 邻苯二酚ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水ml 2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 浓度ug/ ml 0 10 20 30 40 50 8 单宁的测定 参考范璐的方法， ①干样品去除杂质，将样品粉碎并全部通过1.0mm孔径的筛网。 ②精确称取试样1g于100ml三角瓶中，加75%二甲基甲酰胺溶液50ml，加塞，室温振荡提取60min，双层滤纸过滤，滤液备用。 ③准确吸取1.0ml提取液于试管中，准确加入6.0ml水、1.0ml8g/L（35ml/L）氨溶液，摇匀，自加氨溶液后计时，10min后以525nm为测定波长，水作空白测定样液的吸光度值。 ④准确吸取1.0ml提取液于试管中， 准确加入5.0ml水、1.0ml(3.5g/L)柠檬酸铁铵溶液、1.0ml氨溶液，摇匀，自加氨溶液后计时，10min后，以525nm为测定波长，水作空白，测定样液的吸光度值。两次测得吸光度值之差为样品中单宁的吸光度值。 ⑤配制单宁酸含量为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml 标准系列，分别吸取标准溶液1.0ml，准确加入5.0m水、1.0ml柠檬酸铁铵溶液、1.0ml氨溶液，摇匀，自加氨溶液后计时，10min 后以525nm 为测定波长，水作空白测定标准溶液的吸光度值 9 可溶性蛋白质的测定 9.1样品处理：小麦分蘖初期，称取各供试品种剪碎叶片0．5g，加入2ml蒸馏水研磨后倒入10ml离心管中，再向残渣中加入6ml蒸馏水分两次冲洗，洗涤液转入离心管，放置半小时，摇匀悬浮后离心20分钟，取上清液，然后定容10ml容量瓶。 9.2样品测定：测定时，取上清液O.1ml加蒸馏水0.9ml，加5ml考马斯亮蓝G一250蛋白质试剂混匀，显色后在595nm波长下测定光密度。用牛血清蛋白绘制标准曲线。蛋白质含量测定公式：样品中蛋白质含量(mg／g)=查得的蛋白质含量(岭)×提取液总体积(m1)／样品鲜重(g)×测定时取用提取液体积(m1)。 9.3标曲的制备： 0~1 000μg／mL 标准曲线的制作：另取6 支10mL 具塞试管，按表取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，做出蛋白质浓度为0~1 000μg／mL 的标准曲线。表2 高浓度标准曲线制作 管号 1 2 3 4 5 6 1000ug/ml标准蛋白液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 10. 蒸馏水（ml） 1 0.8 0.6 0.4 0.2 1.0 考马斯亮蓝G-250试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量（ug） 0 200 400 600 800 1000 OD595nm 试剂配制：（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。