2010版中国药典微生物限度检查操作流程.docVIP

**医院药检室微生物限度检查操作流程图2010版 取上述培养物1ml接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB） 取上述培养物1ml接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）中,培养18~24h。 若上述培养物为阳性，则用接种针挑2~3个菌落，分别于TSI高层及斜面穿剌接种，培养18~24h。如斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层无黑色色，判供试品未检出沙门菌。 供试液准备 取上述培养物分别划线接种于胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）和曙红亚甲兰琼脂培养基（EMB）平板上,培养18~24h。（必要时延长至40~48h） 取供试品20g/ml接种至200ml营养肉汤培养基中、混匀、培养18~24h。《沙门菌检查》 [含动物组织及动物类原药材粉的口服制剂检查此]项 取上述1:100级的稀释液1ml加缓冲液9ml混匀，作为1:1000的供试液。取上述1:10级的稀释液 取上述1:100级的稀释液1ml加缓冲液9ml混匀，作为1:1000的供试液。 取上述1:10级的稀释液1ml加缓冲液9ml混匀，作为1:100的供试液。 取供试品10g/ml加Ph7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml混匀，作为1:10的供试液。 取上述1:10稀释级供试液10ml于胆酸乳酸培养基100ml中培养18~24h 取上述1:10稀释级供试液10ml于胆酸乳酸培养基100ml中培养18~24h 《大肠埃希菌》 取上述各1:10和1:100级别稀释液1ml于平皿中(每组稀释级2个平皿),注入10~20ml玫瑰红钠琼脂培养基、混匀、凝固，于23~28℃倒置培养5天 《霉菌及酵母菌数》 取上述各级别稀释液1ml于平皿中,(每组稀释级2个平皿)注入10~20ml营养琼脂培养基、混匀、凝固，于30~35℃倒置培养72h，计数 《细菌数》 取上述各级别稀释液及缓冲液1ml分别加入含10ml乳糖胆盐发酵培养基的试管4支（一支阴性对照管）、混匀，培养18~24h。 《大肠菌群》 [含药材原粉的制剂检查此项] 取上述培养物0.2ml接种至含5ml 取上述培养物0.2ml接种至含5ml4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）培养基的试管内,培养,于5h、24h在365nm 紫外光下观察， 若呈现荧光为MUG阳性，未呈现荧光为MUG阴性，观察后，沿管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性，呈本色为靛基质阴性。 若平板上菌落生长的特征与药典所列菌落相符或疑似，则从该平板上挑4~5个疑似菌落，分别接种于乳糖发酵管中，培养24~48h。若产酸产气，判该乳糖胆盐发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群 若平板上菌落生长的特征与药典所列菌落相符或疑似，则从该平板上挑4~5个疑似菌落，分别接种于乳糖发酵管中，培养24~48h。若产酸产气，判该乳糖胆盐发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群 若上述乳糖胆盐发酵管无菌生长或未产酸产气，判该管未检出大肠菌群；若产酸产气则取上述发酵中的培养物分别划线接种于EMB平板上，培养18~24h。若平板上无菌落生长或生长的菌落特征与药典所列菌落不符，判该管未检出大肠菌群。 若MUG与靛基质为一阳性一阴性。则取胆酸乳酸培养基的培养物划线接种于EMB平板上，培养18~24h，若平板上无菌落生长或生长的菌落与药典上所列菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。若特征相符应进行分离、纯化、染色镜检，确认是否为大肠埃希菌。若MUG阳性，靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；MUG阴性，靛基质阴性则判供试品未检出大肠埃希菌。 若MUG与靛基质为一阳性一阴性。则取胆酸乳酸培养基的培养物划线接种于EMB平板上，培养18~24h，若平板上无菌落生长或生长的菌落与药典上所列菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。若特征相符应进行分离、纯化、染色镜检，确认是否为大肠埃希菌。 若MUG阳性，靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；MUG阴性，靛基质阴性则判供试品未检出大肠埃希菌。