生物化学实验Km-2016年第一节课 生化实验PPT技术文档.pptVIP

酶的概念 由活细胞产生的、具有催化功能的生物大分子。 酶与医学健康的关系 遗传性酶病发病机制 控制某一酶合成的基因发生突变，或者控制其结构基因的调控基因发生突变，引起酶在质或者量上发生改变，其催化作用也随之发生改变，从而间接导致代谢紊乱，引起机体代谢障碍。 经典型苯丙酮尿症(PKU I) 基 因 定 位： PAH基因：12q24.1 突变类型广泛，呈现明显的遗传异质性 临 床 表 现： 出生时正常，进奶以后，一般在3-6个月时，即可出现症状，1岁时症状明显。 外貌 因黑色素足，在生后数月毛发皮肝和虹膜色泽变浅，皮肤干燥，有的伴有湿疹， 由于尿和汗液中排出苯乙酸，呈特殊的鼠尿臭味 神经系统症状早期可有神经行为异常，如兴奋不安，多动或嗜睡，精神萎靡. 诊断 本病为少数可治性遗传性代谢病之一，上述症状经饮食控制治疗后可逆转，但智能发育落后难以转变，应力求早期诊断治疗，：以避免神经系统的不可逆损伤。由于患儿早期症状不典型，必须借创实验室检测。 诊 断 酶学诊断 PAH仅存在于肝细胞，需经肝活检测定，不适用于临床诊断。其他3种酶的活性可采用外周血中红、白细胞或皮肤成纤维细胞测定。 DNA分析 该技术近年来广泛用于PKU诊断、杂合子检出和产前诊断。但由于基因的多态性，分析结果务须谨慎。 治疗 诊断一旦明确，应尽早给予积极治疗，主要是饮食疗法。开始治疗的年龄愈小，效果愈好。 低苯丙氨酸饮食主要适用于典型PKU以及血苯丙氨酸持续高于1.22mmol/L的患者。由于苯丙氨酸是合成蛋白质的必需氨基酸，完全缺乏时亦可导致神经系统损害，因此对婴儿可喂给特制的低苯丙氨酸奶粉，到幼儿期添加辅食时应以淀粉类、蔬菜、水果等低蛋白食物为主。 预防 避免近亲结婚。开展新生儿筛查，以早期发现，尽早治疗。 对有本病家族史的孕妇必须采DNA分析或检测羊水中蝶吟等方法对其胎儿进行产前诊断。 酶的应用 用酶进行疾病的诊断 用酶进行疾病的预防和治疗 用酶制造各种药物 变量 标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量。 纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。 可信度 有效范围（线性范围） 标准物质的物理/化学属性有一定的有效范围。 仪器存在一定的相应范围。 因此标准曲线存在一定的有效范围 实验报告的撰写 实验方法与步骤及以上略 实验结果 结果的呈现要清晰、规范，计算过程清楚，作图要规范。 分析讨论 简单分析实验结果 讨论实验方法（如测定生物分子含量的方法、标准曲线的原理与应用以及数据处理等）。实验中有什么特别要注意的地方。在实验中出现了什么问题，应该如何解决。实验中应如何减少系统误差、等等。 讨论Km测定的方法（有各种什么样的方法可以用于血糖测定，各种方法的优缺点；临床是用什么方法进行测定的） Km测定的意义（包括临床上在什么情况下进行Km测定；是否有必要） 展开到临床上其他生命指标的测定。 谢 谢！ 分光光度计的使用 分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比。 有效数字的处理 实验重复 有效数字 标准曲线的绘制 标准曲线（standard curve）是指通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，而得到的性质的数值曲线。 标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。 在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析。 标准曲线的要素 变量 可信度 有效范围 标准曲线的制作 图表名称 坐标 字体 大小 公式、相关系数 酚试剂与酚生成蓝色的化合物，其光密度与颜色，颜色与酚,酚与酶活性成正比。 * * 酶Km值的测定 又称先天性代谢缺陷病： ----编码酶蛋白的基因发生突变导致合成的酶结构或数量改变所引发的机体代谢紊乱。 遗传性酶病 遗传性酶缺陷引起的物质代谢途径受阻示意图 （一）苯丙酮尿症(PKU) 我国发病率1/165000 病 因：苯丙氨酸羟化酶（PAH)基因突变导致PAH缺乏，使苯丙氨酸不能合成酪氨酸。 × ③ 苯丙氨酸 对中枢神经 毒性作用 抑制大脑正常发育 酪氨酸 多巴神经功能 智力低下 黑色素 毛发皮肤变浅 × 苯丙酮酸 （一）苯丙酮尿症(PKU) （一）苯丙酮尿症(PKU) ? ?? 1、新生儿期筛查 新生儿喂奶3日后，采集足根末梢血，吸收再生厚滤纸上，晾干后邮寄到筛查中心，采用Guthrie细菌生长抑制试验半定量测定，其原理是苯