细胞油红O染色的操作步骤教学内容.docVIP

细胞油红O染色的操作步骤 点击次数：348 发布时间：2011-4-1 1、10%中性甲醛的配制 材料：中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶 称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。 ? 2、 染色液的配制 材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸 称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。 3、培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。 4、.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。 5、注意事项： 脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。各有操作差异。以下是各论坛方法小结，不全。 (1).完全成熟饱满的脂肪 细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。 (2).细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。 (3).如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。 6、染色步骤： (1) 先小心轻缓倒去培养夜。? (2) 用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。 (3)加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可)。固定的是细胞膜。? (4) 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min(除去一些杂质， 染色结果更清晰)。 (5)染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。 (6)脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少)。? (7) 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗(这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。 (8)甘油明胶封片(封片后可长期保存)。 (9)显微镜观察。 三、显示脂类的油红法： （1）操作步骤： 1、福尔马林固定后的恒冷箱切片附贴于载片上或游离切片，厚5-10nm， 2、60%异丙醇稍洗切片， 3、油红O液染5-15min， 4、60%异丙醇洗去多余染液， 5、自来水洗， 6、苏木素染细胞核2min， 7、自来水洗，如果需要可分化， 8、水洗至细胞核蓝化5-10min， 9、擦去多余水分，甘油明胶封固。 结果：脂类物质显示红色，细胞核显示蓝色。 （II）试剂的配制： 油红o（oil red o） 0.5g 异丙醇（isopropanot） 100ml 将异丙醇放入三角烧瓶，再加入油红O，于水浴中慢慢加热使之溶解，待至完全溶解后取出，冷却至室温后，过滤，装于棕色小磨沙口瓶保存，临用前取6ml加蒸馏水4ml，混合后静置10min后过滤，染色时间5-15min。 飞速英语 模块四 考点精练 6年级下册 Unit 1 A卷: 课堂点拨题 一.一般过去式 1. there be的过去式 (1)【易错】______ there any people here yesterday? No, but there _______some people today. A. Are, are? B. Is , is?? C. Was, is D. Were , are (2)【易错】There _______ ( be ) any milk in the glass just now. 2.过去式的不规则变化 (1)The lion let the mouse ______. A. go?? ?? ?? B. goes ?? ?? C. went (2)【易错】The mouse helped the lion _______ . A. get out ?? ? B. got out ?? ?? ?? ? C. get up (3)At last, the policeman ________ ( let ) the man _______ ( go ) . (4)—What did the lion and the mouse__________(become)? —They___________(become)friends. 4.关于“过去式”的几个时间状语 (1)??????????, the mouse saw