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第3章 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）教学要求了解高效液相色谱仪的一般构造流程及部件熟悉高效液相色谱法色谱条件的选择掌握液相色谱的各种分离机理及适用对象掌握各种检测器的原理及特性掌握常用液相色谱固定相及流动相的特性及选用原则学时：4学时滁州学院材料与化学工程学院液相色谱是以液体为流动相的色谱方法。现代液相色谱采用高压输液系统输送流动相，且分析速度快、分离效率高。故称高效液相色谱法（HPLC）；又称高压或现代液相色谱法 （High Performance Liquid Chromatography） HPLC则适合于分析用气相色谱难以分析的物质。 如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。因此，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱。滁州学院材料与化学工程学院§2-1 高效液相色谱法的特点 特点：高压 ：采用高压输液设备，（150~350）× 105 Pa高速：分析速度快；高效：柱效很高。（n30000） 可以在数分钟内完成数百种物质的分离。高灵敏度：10-9g （UV）；10-11g （荧光检测） 局限性：设备昂贵维持费较高（柱填料和流动相价格高 ）滁州学院材料与化学工程学院 HPLC与GC的比较 分析对象及范围： GC：气体和低沸点的稳定化合物。（~20%） HPLC：高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物（~80%） 流动相的选择：GC：有限的几种气体，只运载作用，对组分作用小；HPLC：液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。 流动相除了起运载作用外，还可与组分作用。 操作温度：GC：需较高温度；HPLC：室温下进行。滁州学院材料与化学工程学院Hd He §3-2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素1、涡流扩散项 He He = 2λdp 同GC：λ:填充不规则因子，dp :填充物平均直径。2、纵向扩散项 HdHd=CdDm/uCd为常数，Dm为扩散系数，u为流动相线速度。液体扩散系数Dm比气体Dg小得多（小10-4~10-5）H = A + B / u + C·u ∴ HPLC中：Hd的影响通常可以忽略 而GC中，纵向扩散项很重要滁州学院材料与化学工程学院3、传质阻力项 （1）固定相传质阻力项Cs：常数（与k有关），Ds为扩散系数，df 固定液厚度 固定相引起峰扩展解决办法：液液分配色谱： 使用薄的固定相吸附、排阻和离子交换色谱： 使用小颗粒填料。滁州学院材料与化学工程学院（2）流动相传质阻力项 ① 流动相中传质阻力相HmCm：常数（与k有关，其值取决于柱直径、形状和填充的填料结构 ） Dm：流动相中扩散系数，dp ：为填充物的平均直径 ② 滞留的流动相中传质阻力相Hsm 多孔固定相造成的部分流动相滞留。Hd可以忽略H = He + Hd+Hs+Hm+Hms滁州学院材料与化学工程学院 HPLC和GC的H-u图十分相似，区别是： HPLC板高H比GC小一个数量级，说明HPLC柱效高 对于HPLC，为了取得良好的柱效，流速不一定要很高。H小，柱效高降低H，提高柱效的方法B/u小，u无需高 减小填料粒度减小填料孔穴深度用低粘度溶剂作流动相采用低速流动相（通常： u=1mL/min）滁州学院材料与化学工程学院§2-3高效液相色谱法主要类型及分离原理根据固定相和分离机理的不同，液相色谱法可分为：1、液液分配色谱法（LLC）2、液固吸附色谱法（LSC） 3、离子对色谱法（IPC）4、离子交换色谱法（IEC）　5、离子色谱法（IC）6、空间排阻色谱法（SEC）滁州学院材料与化学工程学院1、液—液分配色谱及化学键合相色谱 液—液分配色谱： 基于组分在两相间多次分配产生差速迁移实现分离。固定相：载体+固定液载体：硅胶； 为了避免固定相流失，固定相和流动相极性要相差大 （与GC不同, GC:极性相似相溶 ）正相色谱： 固定液为极性，流动相为非极性反相色谱：固定液为非极性，流动相为极性。由于液—液分配色谱固定相易流失，现已被化学键合相色谱所替代。H2O、甲醇等使用方便；价格便宜应用最普及滁州学院材料与化学工程学院 化学键合相色谱(CBPC)通过化学反应将有机基团键合到硅胶（载体）表面上， 代替机械涂渍的液体固定相。这种固定相避免了固定相流失，大大改善了固定相功能，适用于梯度洗脱，分离选择性大大增加。 化学键合相色谱的出现，是HPLC的重大突破化学键合色谱是HPLC最常用的固定相，大约占HPLC固定相的四分之三。它适用于分离几乎所有类型的化合物 。滁州学院材料与化学工程学院2、液－固吸附色谱（adsorption chromatography）：基于组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能力而分离。组分分子结构与吸附剂几何结构相适应时，易于吸附应用：分离几何异构体分