流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur).pdfVIP

一、开机程序： 一、开机程序： 1. 检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态 （鞘液为鞘液桶体积的 3/4 位 1. 检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态 （鞘液为鞘液桶体积的 3/4 位 置，可以连续工作 3 个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足 置，可以连续工作 3 个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足 够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中 够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中 气压。 气压。 2. 依次打开流式细胞仪 FACSCalibur 稳压器、主机开关、电脑开关，打印 2. 依次打开流式细胞仪 FACSCalibur 稳压器、主机开关、电脑开关，打印 机。 机。 3. 气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于 STANDBY 状态，做 Prime，以 3. 气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于 STANDBY 状态，做 Prime，以 排除管路中气泡。 排除管路中气泡。 二、运行FACSComp软件、检查仪器状况 二、运行FACSComp软件、检查仪器状况 1. 制备三色标准微球样本。一般情况向 1ml 鞘液 （或过滤 PBS）中加入 1. 制备三色标准微球样本。一般情况向 1ml 鞘液 （或过滤 PBS）中加入 1 滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。 1 滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。 2. 机器预热 5 min，打开 FACSComp 软件，选择保持路径。选择所需校 2. 机器预热 5 min，打开 FACSComp 软件，选择保持路径。选择所需校 正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。 正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。 3. 在软件界面左侧 Assay Selection 选项中选择质控类型，即实验过 3. 在软件界面左侧 Assay Selection 选项中选择质控类型，即实验过 程中是否需要清洗样品。 程中是否需要清洗样品。 4. 上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。 4. 上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。 5. 仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 5. 仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 6. FACSComp 软件运行完毕，显示结果通过测试。 6. FACSComp 软件运行完毕，显示结果通过测试。 7. 做 Set up。 7. 做 Set up。 8. 打印校正结果，退出 FACSComp 程序。 8. 打印校正结果，退出 FACSComp 程序。 备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在 备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在 调节灵敏度 （Sens）时，一定要用 “Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。 调节灵敏度 （Sens）时，一定要用 “Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。 在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby” 在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby” 状态。 状态。 三、样品分析软件：CellQuest Pro 三、样品分析软件：CellQuest Pro 1. 保证机器预热 5 min，打开 CellQuest Pro 软件，选择“联机”。 1. 保证机器预热 5 min，打开 CellQuest Pro 软件，选择“联机”。 Acquire  Connect to Cytometer  Acquire  Connect to Cytometer