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共享知识 分享快乐 共享知识 分享快乐 流式细胞仪上机操作培训手册 流式细胞仪上机操作培训手册 一、样本处理 一、样本处理 以 表面抗原的流式检测步骤为例 以PBMC 表面抗原的流式检测步骤为例 PBMC 1) PBMC 1) 取样。取新鲜提取或冻存后复苏的 PBMC； 取样。取新鲜提取或冻存后复苏的 ； 2) PBMC 2) 编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份 PBMC 设两管： 编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份 设两管： a) 1 a) 1 号管：相应同型对照； 号管：相应同型对照； b) 2 CD3,CD4,CD8,CD56 b) 2 CD3,CD4,CD8,CD56 号管： 四标管； 号管： 四标管； 6 6 // 个细胞 管），分别加到已经标记 3) 100ul / 1×10 个细胞 管），分别加到已经标记 3) 100ul / 1×10 加样。用移液器取 细胞 管（约 加样。用移液器取 细胞 管（约 好的流式管底部； 好的流式管底部； 4) 1ml PBS/ 1600rpm/min 6min 4) 1ml PBS/ 1600rpm/min 6min 洗涤。加入 管，涡旋 ，离心 ； 洗涤。加入 管，涡旋 ，离心 ； 5) 100 μl PBS/ 5) 100 μl PBS/ 染色。弃上清，加入 管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流 染色。弃上清，加入 管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流 30min 式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育 30min （操作尽量 式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育 （操作尽量 保持在避光条件下进行。） 保持在避光条件下进行。） 6) 1ml PBS/ 1600rpm/min 6min 6) 1ml PBS/ 1600rpm/min 6min 洗涤。加入 管，涡旋 ，离心 ； 洗涤。加入 管，涡旋