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实用文档 实用文档 流式细胞仪上机操作培训手册 流式细胞仪上机操作培训手册 一、样本处理 一、样本处理 PBMC 表面抗原的流式检测步骤为例 PBMC 表面抗原的流式检测步骤为例 1) 取样。取新鲜提取或冻存后复苏的 PBMC； 1) 取样。取新鲜提取或冻存后复苏的 PBMC； 2) 编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份 PBMC 设两管： 2) 编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份 PBMC 设两管： a) 1 号管：相应同型对照； a) 1 号管：相应同型对照； b) 2 号管：CD3,CD4,CD8,CD56 四标管； b) 2 号管：CD3,CD4,CD8,CD56 四标管； 6 6 3) 加样。用移液器取 100ul细胞/管（约 1×10 个细胞/管），分别加到已经标 3) 加样。用移液器取 100ul细胞/管（约 1×10 个细胞/管），分别加到已经标 记好的流式管底部； 记好的流式管底部； 4) 洗涤。加入 1ml PBS/管，涡旋 1600rpm/min，离心6min； 4) 洗涤。加入 1ml PBS/管，涡旋 1600rpm/min，离心6min； 5) 染色。弃上清，加入 100 μl PBS/管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各 5) 染色。弃上清，加入 100 μl PBS/管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各 流式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育 30min （操作尽 流式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育 30min （操作尽 量保持在避光条件下进行。） 量保持在避光条件下进行。） 6) 洗涤。加入 1ml PBS/管，涡旋 1600rpm/min，离心6min； 6) 洗涤。加入 1ml PBS/管，涡旋 1600rpm/min，离心6min； 7) 重悬。弃上清，加入 0.5m l PBS/管，混匀，上机检测 (可选择 BD FACSCanto 7) 重悬。弃上清，加入 0.5m l PBS/管，混匀，上机检测 (可选择 BD FACSCanto II或 BD Accuri C6)。 II或 BD Accuri C6)。 （注：若不能及时上机，应加入4%多聚甲醛固定，并于 4℃避光保存。） （注：若不能及时上机，应加入4%多聚甲醛固定，并于 4℃避光保存。） 8） 试验结果分析。 （注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光补偿）。 8） 试验结果分析。 （注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光补偿）。 参考值： 参考值： CD3+ 60.8-75.4% CD4+ 29.4-45.8% CD3+ 60.8-75.4% CD4+ 29.4-45.8% CD8+ 18.2-32.8% NK （CD3-CD56+） 9.5-23.5% CD8+ 18.2-32.8% NK （CD3-CD56+） 9.5-23.5%