动物诊疗技术1 动物诊疗技术1 白细胞分类计数.ppt

白细胞分类计数 以百分率表示各种类型白细胞间的数量关系，称为白细胞分类计数。 1、血片的制作 取一清洁、干燥、脱脂的玻片，作为载片。取一端光滑、平整的载片，作为推片。 取供检血一小滴，放于载片的一端;将推片约倾斜30。～40。，放于血滴之前，向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散开之后，以均等速度轻轻向载片另一端推动，即形成一血膜(图1-56)，自然风干，待染。所涂血片要求血液分布均匀，厚度适当，血膜位于玻片中央，两端留有适当空隙，以便注明畜别、编号及日期。 白细胞分类计数 2、血片的染色 (1)瑞氏染色法 1)染液的配制瑞氏染色粉0.1g甲醇(化学纯)60m1 将染粉置于研钵中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将己溶解的染液倒入洁净的棕色瓶，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此连续操作，直至染粉全部溶解和甲醇用完为止。在室温中保存1周(每日振摇1次)后，过滤，即可应用。 白细胞分类计数 2)缓冲液的配制1磷酸二氢钾30m1 1磷酸氢二钠20ml 蒸馏水加至1000ml 染料对氢离子浓度均较敏感，染色时由于酸碱度的改变，蛋白质与染料所形成的化合物可重新离解，故染色时染液的pH能够影响染色的结果。 瑞氏染色的适当pH为6.4～6.8。当染液偏于碱性时，可与缓冲液中酸基起中和作用;染液偏于酸性时，可与缓冲液中碱基起中和作用;维持染色时的一定酸碱度，才能使染色结果满意。 白细胞分类计数 3)染色先用蜡笔在血膜两端各划一线，以防染液外溢，将血片平放于水平支架上;滴加瑞氏染液，将血膜盖满为止;待染色1～2min后，再加等量磷酸盐缓冲液，并轻轻摇动或以口吹气，使染色液与缓冲液混合均匀，再染色3～5min;最后用蒸馏水冲洗血片，待自然干燥或用吸水纸吸干后镜检。染色良好的血片呈樱桃红色。 白细胞分类计数 (2)姬姆萨氏染色法 1)染液的配制姬姆萨氏染色粉0.5g 纯甘油(中性)33m1 纯甲醇(中性)33m1 先将姬姆萨氏染色粉加人甘油内，置水浴加温(56～60℃)2h，使染色粉溶解;再加人甲醇，混匀，保存于棕色瓶中，保存1周后滤过即成原液。 临用时取此原液0.5～lml，加于蒸馏水l0ml中，配制成应用液。 白细胞分类计数 2)染色先将血片用甲醇固定3～5min；然后滴加姬姆萨氏应用液，至盖满整个血膜(约2ml)，根据室温高低和血片厚度，染色10～30min。用蒸馏水冲洗、吸干、镜检。染色良好的血片呈玫瑰红色。 3、镜检计数 先用低倍镜做大体观察，再换用油浸镜，边移动血片边检视白细胞并计数。通常在血片的两端或两端的上、下部分按二区或四区计算法(图1-57)，有秩序地移动血片，计数白细胞总数100～200个。一般计数100个白细胞，并按各类白细胞所占有的百分数，计算出其比值。 白细胞分类计数 4、各类白细胞的形态和染色特征 根据胞浆中有无染色颗粒，将白细胞区分为颗粒细胞和无颗粒细胞。前者又根据胞浆染色颗粒的着色特征，而分为嗜碱性、嗜酸性及嗜中性白细胞;后者包括淋巴细胞及大单核细胞。 嗜碱性白细胞的胞浆中含有呈深紫色较小的染色颗粒。 嗜酸性白细胞的胞浆中含有较大的呈鲜红色的染色颗粒。 嗜中性白细胞的胞浆中有呈现淡玫瑰红色的小颗粒。依其发育各阶段的细胞核形态特征又分为髓细胞、幼稚型、杆状核和分叶核细胞。 髓细胞的细胞核色淡、着色不均，呈长圆形或豆形。 幼稚型的细胞核着色较淡，多呈肾形。 杆状核细胞的核致密、色深，弯曲呈粗细较均匀的带状、S形、马蹄形等。 分叶核细胞其核分成2～6个分叶，并在各分叶间有细丝状连接。 淋巴细胞的细胞核多为圆形或椭圆形，细胞浆均染为天蓝色。 大单核细胞体积大，呈不正、多边、多角形，胞浆呈烟灰色，较暗，核呈紫褐色，近似椭圆或不正形。 白细胞分类计数 5、正常值 健康动物各类白细胞分类数值见表1-70 表1-7健康动物各类白细胞分类数值(%) 动物种类嗜碱性细胞嗜酸性细胞嗜中性细胞淋巴细胞大单核细胞幼稚型杆状核分叶核马0.54.54.053.035.03.0牛0.54.00.54.033.056.02.0水牛0.510.04.535.047.03.0猪0.52.51.05.035.053.03.0羊0.55.51.033.057.03.0 白细胞分类计数 6、临床意义 (1)白细胞增多 嗜中性白细胞增多:见于猪、牛巴氏杆菌病、马腺疫、肺炎及化脓性感染等。 嗜酸性白细胞增多:见于某些蠕虫病、过敏性疾病及湿疹等。 淋巴细胞增多:见于结核、鼻疽、布氏杆菌病、猪瘟及牛梨形虫病。 单核细胞增多:见于败血性疾病，某些梨形虫病及李氏杆菌病等。 白细胞分类计数 (2)白细胞减少 嗜中性白细胞减少:见于病毒性传染病、药物中毒(如长期服用抗生素)、各种疾病的垂危期。 嗜酸性白细胞减少:见于败血症、某些病毒病及牛梨形虫病等。 淋巴细胞减少:多为嗜