医学免疫学课件：22 23 免疫诊断与防治.ppt

第二十二章 免疫学检测技术的基本原理 主要内容 抗原或抗体的检测 免疫细胞的检测 抗原抗体反应特点 抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可逆性 抗原抗体反应的可见性 抗原抗体比例合适 肉眼可见IC (凝集物，沉淀物） 抗原-抗体反应影响因素 1 电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为 稀 释液 ，以供给适应浓度的电解质。 2 温度：一般常使用反应在37度水浴 或孵育箱中进 行。 3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度 为PH6~8。 往往采用人或动物的血清作为抗体来源， 体外的抗原抗体反应也称血清学反应。 经典的血清学反应： 凝集反应（agglutination reaction) 沉淀反应(precipitation reaction) 免疫标记技术 （一）凝集反应(agglutination)? 直接凝集反应 间接(被动)凝集反应 (二) 沉淀反应 概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在 一定条件下形成沉淀物的现象。 可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、 组织浸出液、细菌滤液等 类型： 1）单向琼脂扩散试验(singlel agar immunodiffusion) 2）双向琼脂扩散试验(double agar immunodiffusion) 3）对流免疫电泳（counter immunoeletrophoresis) (三) 免疫标记技术 利用荧光素、酶、放射性核素等标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 四大标记技术： 1）免疫酶测定(enzyme immunoassay, EIA) 酶联免疫吸附试验(ELISA）? 2）免疫荧光技术(immunofluorescence technique) 3）放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA) 4）免疫胶体金技术（immunological colloidal gold signature, ICS) 1. 酶免疫测定 用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。 抗原抗体反应＋酶促反应 酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA） 将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进行检测的抗原抗体反应。 特点：敏感性高（ng-pg），操作简便 类型： 直接法(双抗体夹心法): Ab +Ag + Ab* 间接法: Ag +Ab + 抗Ab* 2. 免疫荧光技术 免疫荧光技术:用荧光素标记一抗或二抗，检测特异 性抗原或抗体的方法。 分类： (1)直接荧光法 （2) 间接荧光法 结果观察: (1) 荧光显微镜 (2) 流式细胞仪(Flow cytometer，FCM) 3、放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA) 用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术 第二节 免疫细胞功能的检测 免疫细胞的分离 免疫细胞的功能测定 一、免疫细胞的分离 外周血单个核细胞 T、B细胞的分离与鉴定 磁珠分离法 荧光激活细胞分选仪分离法 （流式细胞术，FCM) 外周血单个核细胞 二、免疫细胞功能的测定 （一） T细胞功能测定： (1)T 细胞增殖(转化)试验： 形态计数 3H-TdR或125I-UdR掺入法 MTT比色法 （2）皮肤试验 淋巴细胞转化试验（形态学示意图） 皮肤试验（结核菌素试验） （二） B细胞功能测定 (1) 单向琼脂扩散试验等测定Ig的含量 (2) 抗体形成细胞测定 溶血空斑形成试验 第二十三章 免疫学防治 类毒素（toxiod） 用细菌的外毒素经0.3%～0.4%甲醛处理制成。 特点：毒性消失,保留免疫原性； 接种后能诱导机体产生