生物药物分析与检验氨基酸多肽和蛋白质类药品检验全解.ppt

第二节 多肽因子类和蛋白质类药 品检验 4 、纯度 ? 基因工程产品蛋白质 纯度 是一项重要指标，但它也是 一项相对的指标，需 根据实际要求而定 。 ? 蛋白质纯度 一般是指 是否含有其他杂蛋白 ，而不包括 盐、缓冲液离子、 SDS 等小分子在内。 ? 目前较常用的是 HPLC 法 （包括凝胶过滤、各种反相 HPLC 、离子色谱、疏水色谱等）、 非还原 SDS凝 胶电泳法 、 毛细管电泳法 （ CE ）、 等电聚焦电泳 ， ? 此外也应用一些化学方法，观察末端是否均一。 第二节 多肽因子类和蛋白质类药 品检验 ? 至少应用两种以上的方法，而且是 两种不同分离机理 的方法来判定蛋白质的纯度才比较可靠。 ? 常发现某一样品在凝胶过滤中是纯的，而在离子色谱 中却分辨为二个组分，反之亦然。 ? 又如一种样品用 凝胶过滤法 和 SDS电泳 证明是纯 的，但这仍不充分，因为这两者 机理相同 。 第八章 氨基酸、多肽因子和 蛋白质类药品检验 ? 基本要求： ? 掌握氨基酸定性鉴别的方法，熟悉氨基酸特殊杂质及 安全性检查，掌握氨基酸含量测定方法，掌握多肽因 子类药物的定性鉴别方法，熟悉多肽因子类药物的检 查方法，掌握多肽因子类药物生物效价的测定方法， 掌握蛋白质类药物的鉴别和检查方法，掌握蛋白质含 量测定和效价测定方法，了解几种氨基酸、多肽因子 和蛋白质药物的质量分析过程。 基本内容 第一节 氨基酸类药品检验 第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 第三节 几种氨基酸、多肽和蛋白质药物的质量分析 第一节 氨基酸类药品检验 ? 氨基酸是 治疗蛋白质代谢紊乱 、 蛋白质缺损 所引起的 一系列疾病的重要生化药物，也是具有高度营养价值 的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效。 ? 目前氨基酸及其衍生物临床应用不断发展和扩大，创 制了一些新的生化药物。 ? 如 甲基酪氨酸 治疗 嗜铬细胞瘤 ? 氧苯丙氨酸 用于 类癌瘤综合征 ? 偶氮丝氨酸 治疗 白血病 ? 乙酰羟脯氨酸 用于 治疗类风湿关节炎 第一节 氨基酸类药品检验 ? 氨基酸为 白色晶状体 ，熔点很高，多在熔融时分解， 都能溶解在强酸强碱中 ，形成的盐多能溶于水。 ? 氨基酸在 等电点 （ pI ）时 溶解度最小 ，最稳定。 ? 中性 pI 值在 5 ～ 6.3 左右。 ? 酸性 pI 值在 2.8 ～ 3.2 左右。 ? 碱性氨基酸的 pI 值在 7.6 ～ 10.8 左右。 第一节 氨基酸类药品检验 一、氨基酸的定性鉴别 ? 旋光度、熔点、溶解度、纸层析、氨基酸自动化分析 、气相色谱等均可作为氨基酸鉴别的依据。 1 、化学鉴别法 ? 氨基酸的 鉴别最常用的方法 是根据所有氨基酸均能与 茚三酮 显蓝紫色。 ? 采用茚三酮显色法，中国药典（ 2010 年）二部对所收 载的氨基酸类药物大多采用此方法进行鉴别。 第一节 氨基酸类药品检验 茚三酮反应： 茚三酮在酸性溶液中与 α - 氨基酸共热 ，引起氨基酸氧化脱氢、脱羧反应，最后生成紫色物 质。 蓝紫色溶液 样品 静置 水 加热 茚三酮 水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? min 15 mL 20 min 3 . . mL 1 mL 5 5 S T mg O O OH OH + H-C-NH 2 COOH R O O OH H + NH 3 CO 2 R C O + + O O HO HO + O O OH H + NH 3 H 2 O C O O O O H + N 第一节 氨基酸类药品检验 2 、光谱鉴别法 （ 1 ）紫外吸收光谱法 在 20 种天然氨基酸中，只有 酪 氨酸 、 色氨酸 和 苯丙氨酸 在紫外区有最大吸收。 ? 酪氨酸的 ? max ＝ 275nm ? 苯丙氨酸的 ? max ＝ 257nm ? 色氨酸的 ? max ＝ 280nm 1 ：酪氨酸 2 ：色氨酸 3 ：苯丙氨酸。 第一节 氨基酸类药品检验 ? 这三种氨基酸可以通过 紫外 吸收光谱 加以鉴别。 ? 精密称取酪氨酸、色氨酸、 苯丙氢酸各适量。 ? 用水制成每 1mL 含 20 μg （色 氨酸）、 40 μg （酪氨酸） 、 200 μg （苯丙氨酸）。 ? 在波长 230 ～ 300nm 测定各氨 基酸的吸收光谱，如右图。 第一节 氨基酸类药品检验 （ 2 ） 红外吸收光谱图 氨基酸在红外