培训资料(三)网织红细胞计数.ppt

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实验三 网织红细胞计数 一、实验原理 网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合,凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构,可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比,或×红细胞计数结果报告其绝对值。 ︵。︵ * 网织红细胞(Ret)    是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞,是尚未完全成熟的红细胞,其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒,颗粒与颗粒连缀成线,线连接成网,故而得名。  分型:丝球型、网型、破网型、点粒型。(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型) ︵。︵ * 网织红细胞 ︵。︵ * 计数方法 1、普通光学显微镜法:活体染色后推片镜检 2、网织细胞计数仪法:荧光染色后用流式细胞术计数 ︵。︵ * 二、试剂器材 1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精(水)溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm(较目镜内径稍小)的圆形硬纸片(正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔,置目镜光阑处,用于缩视野法计数) ︵。︵ * 三、操作步骤 1. 染色:于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴,任其自然凉干后备用,取末梢血或抗凝血一滴,于已干燥的染料上,用推片角混匀后,将两玻片盖合(玻片法);试管法取染液2滴入试管,加血2滴混匀,封闭好,待15分钟以上时间, 2. 推片:取混合液1小滴于载玻片的一端,推制成薄而均匀的血膜, 3. 低倍镜浏览,选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分(体尾交界处),滴香柏油转换至油镜,在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数(或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数,换一视野同法计数至几个视野RBC总数>1000为止)。 ︵。︵ *      Miller窥盘 A 3 1 B 将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。 ︵。︵ * ︵。︵ * 四、计算 1.Miller窥盘法:网织红细胞(Retic)百分率(%)= (大方格内Retic总数)/(小方格内RBC总数×9)×100% 2.直接计数法:网织红细胞(Retic)百分率(%)= 多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数×100% ︵。︵ * 五、注意事项 1.用酒精染液时,应待玻璃片上的酒精挥发干燥后,才能加血液,染色时应用推片角不停搅动,使染料和血液混合,防止凝固。 2.染色时间一定要充足,混合后不能立即推片,室温低时染色时间应适当延长,应覆以另一玻片防止蒸发。 3.染液与血液比例以1:1为宜,贫血适当加血量。 4.涂片厚薄均匀适宜,弓形移动,多个区域计数 5.试剂应定期重配,以免变质沉淀。 6.与变性珠蛋白小体鉴别 ︵。︵ * 六、参考值 成人:0.005-0.015(0.5%-1.5%) 新生儿:0.02-0.06(2%-6%) 儿童:0.005-0.075(0.5%-7.5%) 成人绝对值(24-84) ?109/L ︵。︵ * 七、临床意义   (1)评价骨髓增生能力,判断贫血类型 再障时,明显降低。绝对值低于5×109/L可做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低。 ︵。︵ *  (2)评价疗效 网织红细胞反应:IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2~3d后,网织红细胞计数值开始上升,7~10d达到最高(10%左右);两周以后逐渐降至正常水平,红细胞、血红蛋白开始升高。 骨髓移植、EPO治疗后:若骨髓开始恢复造血功能,RMI升高,网织红细胞计数值上升。 ︵。︵ *

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