HER2免疫组化检测的质量控制参考幻灯片.ppt

如何达到高质量免疫组化检测 ? 勿让低年资实验室技术人员配置试剂 – 若试剂未能正确配制，免疫组化结果将不可靠 – 低年资技术人员应接收试剂配制训练及上级指导监督 ? 正确的抗体稀释可避免免疫组化的误差 – 记录每次抗体稀释的浓度，每次登记相应日期及时间 – 如遇错误检测结果，上述记录数据可用来追溯错误原因 ? 完善改进抗原修复方法 – 较耗时但必须进行 设计验证步骤 ? 目的 – 确定经证实或验证之相关实验步骤是否可于本实验室可行 ? 确定检测参数 – 固定 – 检测方法及条件 – 试剂及浓度 – 操作设定 ( 若自动化操作 ) – 操作人员技术能力 ? 样本 ( 检测组 ) – 选择 25 – 100 个样本用不同经证实的检测方式进行检测，可使用组织芯片 ? 请注意 : 乳腺癌与胃癌标本进行检测验证应分开进行 设计验证步骤 ? 记录实验验证的每一操作步骤 – 这些记录可用于建立实验室标准化操作参考指南 ? 记录所有操作步骤 ? 若任何一个步骤发生变化，整个实验必须重做 ? 目标：阳性及阴性实验验证组与原实验结果达 95% 的一致性 使用自动化平台有助 HER2 检测标准化 方法 抗体 单位 HER2 检测准确性 自我评估 专家评估 自动 4B5 6 94.7% 95.2% 自动 A0485 3 90.0% 92.0% 自动 CB11 4 81.0% 83.5% 手动 A0485 6 78.4% 85.7% 手动 CB11 9 81.6% 82.0% 手动 SP3 2 78.0% 88.0% 如果使用自动化检测，必须基于现有的经验证的手动操作方案 PQCC 委员会提供数据 ? 国家质量控制认证项目中自动与手动 HER2 检测方法对比 HER2 检测的影响因素：检测后 35 影响 HER2 检测结果之因素：检测后 图像分析 方法 判读标准 报告内容 评分系统 HER2 检测偏倚 检测后 Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25 :118 – 145. 影响 HER2 检测结果之因素：检测后 检测结果判读标准及评分系统 ? 需依国内 / 国际 HER2 检测指南进行标准化操作 HER2 检测偏 倚 检测后 HER2 检测偏倚 判读标准 评分系统 图像分析 方法 IHC 检测结果判读及评分 ? 多数操作指南推荐下列分析免疫组化检测结果的标准： – 依细胞染色百分比及强度进行评分 : ? 乳腺癌 : 全膜染色 – 评估染色侵入部分，但不包括原位部分 – 寻找完整深染色及均匀的全膜区域 ? 胃癌：基底侧膜、侧膜或完全性膜染色 – 分析检测结果时，细胞质染色应排除在外。若细胞质染色干扰细胞膜染色结果 判断时，应重新检测。 – 正常上皮细胞不应有染色出现。若出现染色，则应重新检测。 – 留意待检标本出现收缩 / 破损 , 这些现象会造成检测结果的假阳性 – 若标本染色不均，应依染色最强部位进行评分 – 根据对照组实验结果决定实验组检测结果是否可信 – 乳腺癌或胃癌检测应使用其特异性评分标准 Wolff AC et al . J Clin Oncol 2007; 25 :118 – 145; . ISH 检测结果判读及评分 ? 所有乳腺癌及胃癌 IHC2+ 标本均需再次进行 ISH 检测进行确定 ? 分析 ISH 检测结果时之注意事项： – 乳腺癌：依 H&E 和 / 或免疫组化染色检测结果来确定肿瘤的侵及程度 ; 原位癌 不予评分 ? 从浸润性肿瘤的两个不同区域数细胞 – 胃癌：由于 HER2 的表达异质性，必需筛选出整个扩增区域包括来自于不同 肿瘤领域的细胞以提供一个更加统一的分析评分标准 ? Brightfield 方法如 SISH 建议确认 HER2 扩增重点区域 – 依对照组检测结果决定实验组检测结果是否可信 – 于两个肿瘤侵及区域计数至少 20 个不重叠的细胞 – 若信号不均匀 (>25%) ，应重新检测 – 若检测结果自发荧光过强或核清晰度较差时则应重新检测 – 若背景干扰信号辨识时，应重新检测 (>10% 细胞质信号 ) – 重复信号作单一计数 Wolff AC et al . J Clin Oncol 2007; 25 :118 – 145; . 影响 HER2 检测结果之因素：检测后 检测报告 ? 检测报告应包含以下信息： – 标本部位及类型 – 固定液种类 – 标本离体至固定时间 – 标本固定的时间 – 抗体 – 检测方法 – 图像分析方法 – 对照设置 HER2 检测偏 倚 检测后 HER2 检测偏倚 报告内容 《乳腺癌 HER2 检测指南（ 2009 版）》编写组 乳腺癌 HER2 检测指南（ 2009 版）中华病理学杂 2009;38(12):836