免疫学检验总结表格.doc

PAGE / NUMPAGES 第一部分：基本理论 抗原抗体反应 抗原 抗原的两种特性：免疫原性、免疫反应性共同抗原、交叉反应、异嗜性抗原、超抗原等 抗原的分类依据性能：完全抗原、不完全抗原依据抗体产生是否要T cell刺激：胸腺依赖性抗原（TD-Ag）、 胸腺非依赖性抗原（TI-Ag） 丝裂原 刀豆蛋白A（ConA） T细胞有丝分裂原 植物凝集素 T细胞有丝分裂原 美洲商陆丝裂原 T细胞和B细胞有丝分裂原 脂多糖（LPS） B细胞有丝分裂原 葡萄球菌A蛋白（SPA） B细胞有丝分裂原 抗体 结构与功能：略 IgG 单体分子、血清和细胞外液中含量最高 IgM 五聚体、分子量最大、不能透过胎盘、宫内感染指标 IgA 有两种类型（血清型和分泌型）、对新生儿早期抗感染十分重要 IgD 单体分子、膜结合型IgD是Bcell分化成熟的标志 IgE 单体分子、含量最少、特异性过敏和寄生虫感染中有意义 抗原抗体反应原理 结合力、亲和力与亲合力 抗原抗体反应特点 ①特异性；②比例问题：等价带、前带、后带；③可逆性 影响因素 反应物 抗原 理化性质、抗原表位等 抗体 来源：R型血清和H型血清 特异性与亲和力 反应条件 电解质、酸碱度、温度、比例 抗原抗体的制备 免疫原的制备 颗粒性免疫原的制备 较简单、分离或纯培养 可溶性抗原的制备 粗抗原制备：捣碎组织、破碎细胞、粗提取 分离与纯化、浓缩与保存 人工免疫原的制备 将半抗原与载体结合，常用蛋白质作为载体 合成肽抗原的制备 合成肽属于半抗原的一种，所以····· 基因工程抗原的制备 获得目的抗原的基因编码，然后扩增纯化 抗体的制备 多克隆抗体制备 使用免疫原免疫动物获得抗体、又叫抗血清；弗氏完全佐剂（CFA，石蜡油+羊毛脂+卡介苗）和弗氏不完全佐剂（IFA，石蜡油+羊毛脂） 大致过程：获取、鉴定、纯化、保存 单克隆抗体（McAb）制备 原理：杂交瘤技术等 亲本细胞的选择与融合：无菌取脾 HAT培养基的选择作用 阳性克隆选择与克隆化 制备单克隆抗体：在小鼠腹腔诱生出肿瘤并产生含McAb的腹水 鉴定、保存、应用 基因工程抗体的制备 抗原抗体的纯化 离心分离 差速离心 粗分离；会有共沉；分离分子量相差大的物质；动力学方法 密度梯度离心 用于分离密度相近大小不同；常用介质为蔗糖、甘油；离心分离的物质密度一定要大于密度梯度介质的最大密度；有共沉 等密度梯度 分离大小相同密度不同的物质；介质常用铯盐；铯盐对铝有腐蚀，防止溅出；不会有共沉 沉淀分离 盐析法 原理：盐的存在减弱了蛋白分子周围的水化膜，导致蛋白发生聚集而沉降 有机溶剂沉淀 优：分辨率高、溶剂易除；缺：有毒、可能会是蛋白失活 非离子聚合物沉淀 常用聚乙二醇 离子交换层析 凝胶层析 常用凝胶：葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、Superdex 亲和层析 利用欲分离物质和它们的特异性配体间具有特异性亲和力 电泳 有支持体 纸电泳 醋酸纤维薄膜 薄层电泳（薄膜或薄板） 非凝胶性支持体区带电泳（淀粉、纤维素粉、硅胶等） 凝胶支持体区带电泳（淀粉液、聚丙烯酰胺凝胶） 无支持体 Tiselius移界电泳 显微电泳 等点聚焦电泳 等速电泳 密度梯度电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳与SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳区别 第二部分：免疫检验技术 沉淀反应①可溶性抗原；②多克隆抗体更适合；③R型血清首选 液相沉淀试验 环状沉淀试验：定性 絮状沉淀试验 抗体稀释法、棋盘格法（找出Ag、Ab最佳比例） 凝胶沉淀试验 单向扩散试验 定量试验；两个曲线 双向免疫扩散试验(定性) 沉淀线数目：抗原或抗体不纯；沉淀线弯向分子量大的；沉淀线靠近浓度低的；可以测定效价(半定量) 免疫电泳 对流免疫CIEP 双扩+电泳；Ag向正极泳动、Ab向负极泳动 火箭电泳 单扩+电泳；定量 免疫电泳 先蛋白区带电泳、再双扩 免疫浊度测定（定量） 透射浊度测定、散射浊度测定 免疫速率抑制浊度测定 用一定量的已知半抗原-载体与限量特异性抗体反应，测定生成的半抗原-载体-抗体所造成的散色速率 凝集反应①颗粒性抗原或带有可溶性抗原的载体②定性试验 直接凝集试验 玻片凝集 定性；多用于红细胞ABO血型 试管凝集 半定量、多用于Ab；外斐试验、肥达试验 间接凝集试验①将抗原与某一载体结合；②常用载体：人O型RBC、SRBC、SPA等 间接凝集试验 正向间接凝集试验 用抗原致敏颗粒检测抗体 反向间接凝集试验 用已知抗体检测抗原 间接凝集抑制试验 用已知抗原致敏颗粒和相应抗体，检测样本中是否有与致敏颗粒相同的抗原，有正向和反向 间接血凝试验 载体颗粒为红细胞 其它凝集试验 抗球蛋白试验（Coombs试验） 是抗球蛋白参与的间接血凝试验 直接Coombs 检测已粘附在RBC的不完全抗体；新生儿