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基于转录组学研究草菇菌种继代过程中的退化机制 摘 要 草菇（Volvariella volvacea）最早栽培于中国，是世界产量第五的重要食用菌，在其 生产过程中易出现菌种退化现象，造成产量下降和经济损失。课题组前期对V971 （S0） 通过尖端菌丝连续继代20 个月，获得不同退化程度的20 代菌株（S1-S20）。本文利用 转录组学结合生理生化及相关酶学分析，对草菇菌种退化机制进行研究，主要结果如下： 1. 探明了菌丝继代培养对草菇生理性状的影响。结果表明，继代菌株的菌丝生长速 度和生物量均随继代次数增加呈先增加后降低的趋势，与 S0 相比，S20 菌丝生长速度 和生物量分别下降了47.33%和42.67% 。利用LBL 培养基对草菇菌株进行染色试验，显 示随着菌种的退化，对LBL 培养基的脱色能力降低，S12 以后失去脱色能力。 2. 获得了菌丝继代培养对草菇基质降解和活性氧清除过程中的主要差异表达基因。 转录组学研究表明，S4、S8、S12、S16、S20 和S0 之间的的差异表达基因数分别为1309、 959、1439、1402、1272 个，共有差异表达基因数为245 个。GO 功能分析显示，差异 表达基因主要富集于生物粘附、代谢过程和催化活性等功能。KEGG pathway 分析显示， 差异表达基因主要在氨基酸代谢、碳水化合物代谢、次生代谢产物合成以及转运与分解 代谢等方面。进一步分析得到与活性氧清除相关的主要差异表达基因 25 个，与降解基 质相关的主要差异表达基因45 个。RT-PCR 验证结果与转录组数据基本一致。 3. 明确了菌丝继代培养对草菇体内活性氧含量及清除活性氧的抗氧化酶活力的影 响。结果表明：S0-S8 体内的O -•含量差异不显著，S9-S20 逐渐增加；H O 含量随着继 2 2 2 代时间延长而逐渐增加。与S0 相比，S20 的O -•和H O 含量分别增加了87.98%和27.18% 。 2 2 2 SOD、CAT、GPX 和GR 酶活力均随继代时间延长呈先增加后降低的趋势，S20 的酶活 力较S0 分别降低了40.44% 、87.59%、76.87%和24.11% 。 4. 明确了菌丝继代培养对草菇基质降解相关酶活力的影响。结果表明，草菇继代菌 株的滤纸酶、内切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶、漆酶和锰过氧化物酶活力逐渐 降低，与S0 相比，S20 的酶活力分别下降了60.00%、26.23% 、63.69%、59.51%、68.51% 和20.66% 。 综上所述，草菇菌种退化可能的机制是：菌丝体连续继代培养造成草菇基质降解和 活性氧清除相关基因表达量下调，降低了相关酶的活力，从而抑制了菌体能量的获得及 营养物质合成，加剧活性氧对菌种的毒害作用，进一步造成菌体生长受阻，导致菌种退 I 甘肃农业大学2020 届硕士学位论文 化现象发生。以上结果为草菇菌种退化鉴定及退化机制研究提供技术手段及理论依据。 关键词：草菇；转录组学；菌丝继代；退化；活性氧；酶活 II 基于转录组学研究草菇菌种继代过程中的退化机制 SUMMARY Volvariella volvacea was first cultivated in China and is the fifth most important edible fungus in the world. During the production process, it is easy to appear species degradation, which leads to the decline of yield and economic losses.